Пелликула зуба / Липецкая городская стоматологическая поликлиника №1

Ведущую роль в развитии воспалительных заболеваний пародонта играет микробная инфекция, находящаяся в твердых и мягких зубных отложениях, в особенности штаммы пародонто-патогенных анаэробных микроорганизмов (Prevotella intermedia, Porphyromonas gingivalis, Actinobacillus actinomycetemcomitans и др.).

Зубные отложения можно разделить на 2 группы:

1. Неминерализованные зубные отложения

Пелликула Зубная бляшка, биопленка Мягкий зубной налет Пищевые остатки

2. Минерализованные зубные отложения

Наддесневой зубной камень Поддесневой зубной камень

На очищенной поверхности зуба образуется неструктурированная бесклеточная пленка — пелликула. Она состоит из протеинов слюны, связанных электростатическими связями.

Пелликула выполняет как защитную функцию, так и способствует прикреплению микроорганизмов.

К пелликуле в течение нескольких часов прикрепляются грамположительные кокки и актиномицеты, затем стрептококки, вейлонеллы и филаменты. Постепенно толщина налета увеличивается за счет деления и накопления бактерий. Низкий уровень гигиены полости рта приводит к образованию зубной бляшки.

Зрелая зубная бляшка состоит из плотного слоя бактерий, образующих ее матрикс. Первоначально образованная бляшка содержит аэробные микроорганизмы. Со временем начинает преобладать анаэробная флора.

В последние годы исследователи ввели понятие «биопленка». Биопленка — это хорошо организованное, взаимодействующее сообщество микроорганизмов.

Микроорганизмы сгруппированы в микроколонии, окруженные обволакивающим межмикробным матриксом, которые имеют свои микросреды, отличающиеся уровнями pH, усваиваемостью питательных веществ, концентрациями кислорода. Бактерии в биопленке общаются между собой посредством химических раздражений (сигналов).

Основными особенностями биопленки являются образование микроорганизмами микроколоний, окруженных защитным матриксом, и взаимодействие между собой разных типов микроорганизмов. Микроорганизмы в биопленке устойчивы к антибиотикам и реакции организма хозяина.

Матрикс, окружающий микроколонии, служит также и барьером, который защищает биопленку от антимикробных средств, как общего действия, так и применяемых местно. Это также объясняет необходимость механического удаления зубного налета и ведущую роль индивидуальной гигиены полости в лечении заболеваний пародонта.

Комплексная чистка зубов

Почетное первое место среди заболеваний полости рта занимают одонтогенные отложения. Все поверхностные образования на зубах подразделяются на физиологические, обусловленные их строением, и патологические. Последние формируются из-за бактерий, скапливающихся в ротовой полости, а также остатков пищи. Особый интерес представляют именно патологические отложения – это зубная бляшка, зубной камень, налет различного вида. Причинами их служат, как и для большинства заболеваний ротовой полости животных — несоблюдение гигиены ротовой полости и профилактических мероприятий, преобладание мягкой пищи над твердой, повреждение структуры эмали, неправильный прикус, нарушение PH слюны. Такие отложения являются причинами заболеваний десен, повреждениями эмали и заболеваний пародонта.

• Пелликула — приобретенная безмикробная пленка, которая образуется после приема пищи с помощью компонентов слюны. Это образование формируется на эмали, имеет три слоя – подповерхностный, поверхностный и над поверхностный. Такая структура делает пелликулу полупроницаемой мембраной. В некоторой степени оболочка защищает целостность структуры эмали, защищает твердые ткани зуба от воздействия кислот. Вместе с тем, пелликула способствует прикреплению бактериальных микроорганизмов к поверхности зубов, что приводит к образованию налета.

• Зубная бляшка – мягкое отложение с многослойной структурой, формирующееся на поверхности пелликулы. В таком образовании находятся почти все представители микрофлоры, характерные для ротовой полости. Бляшки локализуются в пришеечной области, естественных углублениях зуба. Представляет собой скопление бактериальных микроорганизмов и продуктов их жизнедеятельности. Основу отложения составляют вещества, которые попадают на поверхность зубов вместе со слюной. Здесь бактерии получают условия для активного размножения. Далее к ним присоединяются внешние микроорганизмы, вызывающие повреждение эмали, воспаление десен.

• Зубной налет – еще один вид поверхностных образований. Он присутствует у всех животных и представляет собой пленку, состоящую из частиц пищи, бактерий, клеток эпителия и некоторых неорганических веществ. Налет может быть мягким или плотным. Из всех видов микроорганизмов, находящихся на поверхности зубов собаки и вызывающих отложение зубного налета, выделяют стрептококк. Он характеризуется чрезвычайной неприхотливостью и нетребовательностью к условиям своего существования. Зубной налет чаще всего образуется на клыках и коренных зубах, реже – на резцах. Предрасположены к зубному налету мелкие, средние и короткомордые породы собак. Такой налет создает условия для образования зубного камня, вызывает повышенную чувствительность, провоцирует кровоточивость и воспалительные процессы десен.

• Зубной камень – кристаллизованное отложение, формирующееся из мягкой массы зубного налета. Он содержит такие органические компоненты, как белки, клетки эпителия, полисахариды. Камни характеризуются значительной плотностью. Источником же минеральных веществ для их образования служит слюна. В зубном камне множество микроскопических пор, в которых размножаются микробы. В результате жизнедеятельности этих организмов выделяется кислота, размягчающая эмаль. Если вовремя не начать лечение, между десной и зубом образуется карман с отложениями зубного камня, воспаление обострится, появятся нагноения. Дальнейшее развитие болезни характеризуется сильной болью, подвижностью зубов, неприятным запахом из пасти и другими симптомами.

Первое что нужно сделать, если вы заподозрили неладное(запах из пасти, слюнотечение, покраснение десен, болезненность при приеме пищи) — записаться на прием к стоматологу, который определит степень поражения. Не нужно пытаться самим снять зубной камень, ведь при сильной кристаллизации вы можете повредить эмаль, травмировать десна.

Самой оптимальной процедурой лечения — является комплексная чистка зубов животным.

Она включает в себя удаление отложений с помощью ультразвукового скайлера, полировку зубов, а также Фторирование. Можно удалить механически с помощью инструментов, но скорость нарастания вторично — увеличивается в разы. Данный метод помогает убрать лишь поверхностные отложения, так что эффективным назвать его нельзя. Но, к сожалению, не каждое животное дастся ввиду болезненности и распространенности процесса, отполировать зубы после снятия камня таким способом.

Полировка — обязательный этап после ультразвуковой обработки. После чистки на зубной эмали остаются микроскопические неровности и частицы камня, что делает ее поверхность шершавой. Если эмаль не отполировать, налет будет оседать на зубах гораздо интенсивнее, чем до чистки и убирать камни придется не раз в полгода, а каждый месяц. Полировка осуществляется двумя способами. Первый подразумевает использование полировочных щеток, второй – специального аппарата, воздействующего на зуб водно-воздушной струей с примесью абразивов

Фторирование – рекомендуется выполнять после полировки эмали для улучшения состояния зубов. После удаления массивных отложений эмаль у корней становится излишне тонкой, что вызывает обострение чувствительности зубов. Нанесение составов с высоким содержанием фторида натрия снижает болевые ощущения и дискомфорт и позволяет быстрее восстановить поврежденные слои.

Пелликула зуба

Государственное бюджетное образовательное учреждение

Высшего профессионального образования

Новосибирский государственный медицинский университет

ГБОУ ВПО НГМУ

Кафедра медицинской химии

УИРС

На тему: «Пелликула зуба: особенности состава и свойства»

Выполнила:

Натальченко Дамиля

II курс, 14 группа

Проверила: Потеряева О.Н.

Новосибирск

2014

Содержание:

1. Определение пелликулы зуба

2. Слои пелликулы зуба

3. Методы окраски пелликулы зуба

4. Структура пелликулы зуба

5. Образование пелликулы зуба

6. Свойства пелликулы зуба

Пелликула   зуба  (лат. pellicula, уменьшительное от peilis — шкура, кожа)— это приобретенная, генетически не детерминированная пленка, возникающая на поверхности зубов человека после их прорезывания. Характерный признак пелликулы зубчатый край и нишы, в которых развиваются микроорганизмы. Толщина суточной пелликулы 2 –4 мкм. В пелликуле много глутаминовой кислоты, аланина, сиаловой кислоты, аминосахаров. Защищает твердые ткани зуба от воздействия кислот, но способствует фиксации микроорганизмов. Пелликула  является структурным элементом поверхностного слоя эмали и может быть удалена лишь с помощью сильных абразивов. Зубная щетка не эффективна.

Она представлена в основном белым образованием, с небольшим количеством связанных с белками углеводных компонентов (гексоза, фукоза и др.). Состоит из 2 белковых фракций. Включает глицин, гликопротеиды, отдельные аминокислоты, аминосахара, которые образуются в результате жизнедеятельности бактерий. В строении обнаруживается 3 слоя: первый — подповерхностный находится в толще эмали и имеет множество отростков, которые заполняют поры, трещины и слабоминерализованные участки эмали; второй слой — средний — тесно связан с эмалью зуба и имеет однородную толщину; третий — поверхностный слой эмали, он располагается в труднодоступных местах, либо под зубной бляшкой.

Пелликулу  трудно выявить невооруженным глазом, она имеет свойство прикреплять бактерии к поверхности зуба, что ведет к образованию агрессивного зубного налета, который называют зубной бляшкой. Для обнаружения  пелликулы  в клинических условиях обычно применяют красители, например эритрозин, под воздействием которого она приобретает ярко-красный цвет, либо раствор Люголя или 2% метиленового синего. Окрашенную  пелликулу  довольно часто можно встретить в клинике под действием хромогенных бактерий, при курении, применении ряда лекарств и т. д.  

Образование пелликулы начинается с взаимодействия кислых групп гликопротеинов си Са2+ зубной эмали, одновременно основные группы гликопротеинов реагируют с фосфатами гидроксиапатитов. Слоенная структура пелликулы обуславливает разницу зарядов в недрах и на поверхности, что придает пелликуле свойства полупроницаемой мембраны. Пелликула дифференцирует потоки макро- и микроэлементов из эмали и в эмаль, обеспечивая ее трофику, дозревание и реминерализацию.

В образовании пелликулы зуба участвуют:

• Кислые белки, богатые пролином;

• Гликозилированные белки, богатые пролином;

• Муцины;

• Лактофферин;

• Гистатины;

• Низко- и высокомолекулярные углеводы.

Между поверхностью эмали и осаждающимися белками возникают ионные связи и гидрофобные взаимодействия.

Прикрепление белков к эмали происходит за счет образования кальциевых мостиков (рис. 1).

рис.1

В полости рта при контакте зуба со слюной она может образовываться за 20—30 минут.  

Пелликула  имеет большое значение в процессах диффузии и проницаемости в поверхностном слое эмали, в защите зубов от воздействия растворяющих агентов. Она придает эмали избирательную проницаемость. Однако при неблагоприятных ситуациях в полости рта  пелликула  может набухать, изменять свой состав и свойства и в этом состоянии благоприятствовать развитию кариеса зубов. Особенно интересна для целей профилактики кариеса зубов избирательная проницаемость  пелликулы  для ряда веществ. Эта биологическая мембрана может регулировать диффузию различных растворов из слюны в зуб и из зуба в слюну.

Состояние  пелликулы  может служить фактором, или ускоряющим возникновение кариеса, или, наоборот, усиливающим реминерализацию эмали.

В последнее время интенсивно изучается клиническая роль  пелликулы  при воздействии различных противокариозных средств, в частности препаратов фтора. Выяснено, что  пелликула  задерживает обратный выход из эмали фторидов. Кроме того, она способствует регуляции поступления фтора в эмаль с целью образования более прочных соединений — фторапатитов.

Белки приобретенной пелликулы зуба (ППЗ) наделены защитными свойствами:

• Используя различные механизмы, белки ППЗ губят микроорганизмы или препятствуют их прилипанию.

• Например: секреторный (из слюны) иммуноглобулин А (IgAs) предотвращает прилипание бактерий к поверхности эмали зубов.

Список литературы:

1. Источник: http://krasgmu.net/publ/1/5-1-0-73

Зубные отложения

2. Источник: http://medbookaide.ru/books/fold1002/book1007/p5.php

Биохимия полости рта

3. Л.М. Тарасенко, К.С. Непорада – Учебное пособие для студентов- Биохимия органов полости рта, 2008. Видавництво «Полтава»

Профессиональная гигиена полости рта в СПб в стоматологии ВашЪ ДанститЪ

Это ряд процедур, при которых с зубов удаляются твердые и мягкие отложения отложения. Мы рекомендуем проводить проф.гигиену раз в полгода, что поможет вам сохранить зубы здоровыми. А если и появляется кариес либо другая болезнь, то при раннем обнаружении лечить ее будет гораздо проще. По традиции начнем с теории. От чего же так яростно заставляют избавляться стоматологи? Нет, речь не о деньгах) Встречайте, зубной налет!

Как он образуется, из чего состоит?

И так, на поверхности хубной эмали есть микропоры и трещинки. К такой поверхности легче прикрепиться (приклеиться), чем к абсолютно гладкой. Уже через 15-20 минут даже после самой тщательной очистки, на поверхности зуба появляется пелликула.

Пелликула — органическая пленка, которая образуется из слюны. Белковые компоненты слюны заполняют поры эмали, плотно с ней связываются. На этот белковый «фундамент» оседают сахара и муцин слюны, которые образут белый налет на зубах. Избавиться от пелликулы с помощью обычной чистки невозможно — она слишком плотно соединена с эмалью. Убрать пелликулу с поверхности зуба можно только с помощью сильных абразивов…

А нужно ли? Роль пелликулы неоднозначна с одной стороны — это естественный барьер, который не дает зубу контактировать с кислотами полости рта, а с другой — затрудняется проникновение в эмаль кальция и фосфора (да-да, зуб «питается» и снаружи, и изнутри). В самой пелликуле микроорганизмов нет, но они большой радостью прилипают на ее поверхность. В частности это стрептококк S.mutans — главная причина кариеса.

Вот на пелликулу начали прилипать различные бактерии, слущенный эпителий полости рта, компоненты слюны, остатки пищи. Формируется зубная бляшка — организованная структура. Между микроорганизмами образуется матрикс, состоящий из белков и гликопротеинов слюны. Бляшка имеет пористую структуру, поэтому в нее легко проникают мелкие компоненты пищи и различные красящие вещества.

Биохимия бляшки очень сложная. Например: после приема пищи, богатой на углеводы, рН внутри бляшки в течение нескольких минут снижается до 4(т.е. до кислой среды), а затем довольно долго восстанавливается до значения 6-6,5.

Объясняется это элементарно — начинается брожение. Бактерии расщепляют сахара и белки, выделяя при этом кислоту. Кислота деминерализует эмаль, оголяя белковую матрицу, которая с успехом поглощается бактериями, которые выделяют кислоту… Так развивается кариес.

Хоть бляшка и прикреплена к зубу достаточно крепко, она относительно легко удаляется при регулярной чистке зубов.

Совокупность бляшек формирует мягкий зубной налет. Что же тогда представляет из себя зубной камень? Все просто — это минерализованный мягкий зубной налет. На матрикс бляшки осаждаются соли фосфата кальция. Начинается этот процесс внутри бляшки, затем переходит на ее оболочку. Со временем бляшка минерализуется полностью.

Зубной камень бывает наддесневой

И поддесневой

«Почему камень чаще всего образуется на внутренней поверхности нижних передних зубов», — спросите вы. Ответ прост: под языком открываются выводные протоки поднижнечелюстных и подъязычных слюнных желез, там постоянно присутствует бОльшее количество слюны, ведь это место можно сравнить с чашей. К тому же, в этом месте плохое самоочищение зубов. Полностью удалить зубной камень может только врач-стоматолог.

Если не брать во внимание качество гигиены полости рта, на образование налета влияют состояние и качество слюны, характер дыхания (носовое или ротовое), характер питания (мягкая, липкая, жесткая, жидкая пища). С теорией закончили, перейдем к самой гигиене полости рта.

Как проводится профессиональная гигиена полости рта

Сначала врач-гигиенист оценивает качество самостоятельной гигиены с помощью красителя зубного налёта.

Далее, зубной камень сбивается ультразвуковой насадкой;

Затем зубы полируются специальными пастами и щётками;

И в завершении проводится обработка пескоструйным аппаратом с содой Air Flow.

После окончания процедуры необходимо на 2 часа ограничить себя в еде и питье, так как они могут окрасить очищенную эмаль. Сейчас поверхность зуба хорошо «притягивает» на себя макромолекулы и ионы, и тут хорошо провести процедуру укрепления эмали с помощью глубокого фторирования и начать использовать систему профилактики кариеса.

Зубная бляшка — полезная информация

Начнем с ответа на вопрос, что такое зубная бляшка? Коронковая часть наших зубов, как мы знаем, покрыта эмалью, на которой располагается так называемая пелликула. Пелликула — это приобретенная тонкая органическая пленка. Пелликула является структурным элементом поверхностного слоя эмали и может быть удалена с помощью сильно абразивных агентов.

Зубная бляшка располагается за пелликулой. Она не имеет цвета, поэтому обнаружить ее крайне тяжело. Для этого используют специальные красители. Для зубной бляшки характерно определенная локализация – пришеечная часть коронки и боковые поверхности зуба. Как правило, зубная бляшка находится под мягким зубным налетом, имеет шероховатую поверхность, не смывается и не удаляется при чистке зубов. Самостоятельно человек не в состоянии удалить зубную бляшку, ее можно «соскоблить» специальными ручными инструментами или ультразвуковым наконечником.

В отличие от пелликулы, в зубной бляшке происходит довольно активная жизнедеятельность микроорганизмов, которая сопровождается кислотообразующей ферментацией и другими процессами метаболизма микробов. В связи с этим, часто под бляшкой можно обнаружить участок деминерализации эмали.

Как уже говорилось выше, зубная бляшка располагается на боковых поверхностях и пришеечной части зуба, при этом она может быть как над десной, так и под ней. Образование бляшки начинается с прикрепления бактерий к пелликуле или поверхности эмали. Рост ее происходит за счет прикрепления новых бактерий.

Зубная бляшка не является остатком пищи, но микроорганизмы находящиеся в ней, используют введенные питательные вещества для образования, так называемого матрикса, который служит материалом для фиксации к пелликуле и друг к другу. Не смотря на то, что питательными веществами для бактерий являются сахароза, фруктоза, лактоза, мальтоза и крахмал, скорость образования бляшки не связанна с питанием, она довольно быстро образуется в ночное время суток, во время сна.

Стоит отметить тот факт, что удаленная бляшка восстанавливается в течение 6 часов, вот почему так важно регулярно посещать гигиениста.

Зубной камень – твердые образования

Зубной камень — твердые образования возникающие на поверхности зубов в случае нарушения обменных процессов полости рта и плохой гигиене полости рта.

Что такое зубной камень, довольно трудно понять без рассмотрения вопроса о пелликуле зуба.

 Любой биологический объект покрыт биологической пленкой. Что касается человека, то специфические пленки покрывают нашу кожу, волосы, коньюктиву глаза и конечно же поверхности зубов. Эти биологические пленки являются абсолютной нормой. Больше того, без этих пленок возникнут проблемы и даже болезненные состояния. 

Биологическая пленка, покрывающая поверхность зубов, имеет специальное название — пелликула зуба.

Пелликула (от лат. pellicula) — приобретенная тонкая органическая пленка, которая образуется из гликопротеинов слюны (сложные молекулы объединяющие углеводы и белки) на поверхности зуба . Толщина пелликулы 1-4 мкм. Является бесструктурным образованием, не содержащим бактерий, и плотно фиксирована на поверхности зуба.  После идеальной чистки зубов пелликула образуется вновь уже через 30 минут.

В случае, если нарушена нормальная физиология полости рта (например пациент жует только на одну сторону, неправильный прикус, плохо полированные пломбы и т.п.) или у человека плохая гигиена полости рта, то к пелликуле фиксируется пищевой налет, белки из состава слюны, слущенный эпителий слизистой полости рта. Через несколько часов, в такой благоприятной среде наблюдается активный рост и размножение бактерий. Под воздействием жизнедеятельности микроорганизмов, продуктов их жизнедеятельности зубной налет становится более плотным и структурированным. Это уже не пелликула, а зубная бляшка.

Зубная бляшка вызывает патологические процессы в тканях эмали и пародонта, если не удаляется в течении более чем 24-32 часа. Проблемы вызывают именно микроорганизмы и продукты их жизнедеятельности — кислоты и ферменты.

Медленно, день за днем в органический матрикс зубной бляшки откладываются кристаллы фосфата кальция и в небольших пропорциях соединения магния, свинца, молибдена, кремния, алюминия, стронция и других химических элементов. Если зубная бляшка не удаляется на протяжении 14 суток то в результате отложения минералов бляшка становится твердой и самостоятельно пациент ее удалить не может. С того момента как зубная бляшка имеет большое количество минералов и стала твердой, она называется зубным камнем.

Далее процесс многократно повторяется: на шероховатую поверхность зубного камня отлично фиксируется новый пищевой налет, далее его колонизируют микробы, затем в него откладываются минералы. Поэтому если посмотреть на зубной камень в поперечном сечении под микроскопом, то можно увидеть зоны чередования более плотных структур и структур с колониями микробов.

С точки зрения клиники очень важно рассматривать два варианта зубного камня:

• наддесневой камень — имеет прямое влияние на развитие кариозного процесса;
• поддесневой камень — имеет прямое влияние на развитие гингивита и пародонтита.

Дентикюр

Главная / Гигиеническая стоматология / Дентикюр

Каждый из нас тщательно следит за своим внешним видом, мы заботимся о ногтях, волосах, лице и теле, но, зачастую мы забываем об очень важном атрибуте нашего образа — красивой улыбке.

Дентикюр, как услуги маникюра и педикюра, в Европейском обществе давно считается обязательной процедурой, которую регулярно посещает каждый человек, заботящийся о своем внешнем виде.

Дентикюр — это установленный комплекс лечебных и профилактических мероприятий по уходу за полостью рта, благодаря которому мы можем поддерживать органы полости рта в здоровом и эстетически красивом состоянии.

Классическая процедура Дентикюр выполняется в 5 этапов, снимается 5 видов отложения, с 5 поверхностей зубов:

1. Снимаем 5 видов отложения. Существует 5 видов налета, отчего налет похож на слоеный пирог.

Неминерализованный налет:

• Пелликула. Он состоит из гликопротена. Пелликулу не видно. Этот слой образуется у нас каждый день, через 2 часа после домашней чистки зубов зубной пастой и удаляется в случае необходимости, например при наличии пигментации у курильщиков или природном окрашивании. 
• Зубная бляшка (биопленка) — это уже слой из бактерий, которые живут в полости рта, слой не видимый без индикации. Поскольку это бактерии (как условно-патогенные, так и патогенные), то они очень быстро размножаются в очень комфортных, влажных и теплых условиях у нас во рту. Поэтому зубной бляшкой покрываются как свои собственные зубы, так и искусственные. Врач гигиенист на этом этапе очищает все конструкции во рту.
• Мягкий зубной налет. Он тоже состоит из бактерий и продуктов их жизнедеятельности, но уже виден без индикации.

Минерализированный налет:

• Минерализованный наддесневой налет. Это, так называемые, «камни»
• Минерализованный поддесневой налет – это биопленка, которая образуется под десной. Затем этот налет связывается с жидкостью , по составу похожей на плазму крови, и образуется сывороточный камень. Отсюда появляется синюшный цвет десны и другие проблемы деснами. Специалист удалит их все с помощью уникального ручного инструментария, нового ультразвукового скейлера (отличается высокой эффективностью и одновременно бережным отношением к тканям), пескоструйным аппаратом.

2. Полировка и чистка 5 поверхностей зубов: вестибулярная, небная, две контактные, жевательная. Этот этап необходим для предотвращения быстрого появления новых отложений. Поверхность зуба становится ещё более чистой, гладкой и ровной, это придаёт ей эстетичный вид.

3. Обработка межзубных промежутков. Именно в межзубных промежутках чаще всего начинается кариозный процесс, так как пациенты обычно пренебрегают чисткой зубов в этих зонах во время ежедневной гигиены полости рта. Поэтому наш врач-стоматолог гигиенист  уделяет большое внимание чистке этих труднодоступных мест.

4. Реминерализация. В этот этап входит кальцинирование и фторирование – процессы укрепления твердых тканей зубов и обогащение их кальцием и фтором. Это необходимо для восстановления минерального баланса зубов, профилактики кариеса, нормализации кислотно-щелочного баланса полости рта и снижения прилипания бактерий к поверхности зубов.

5. Урок гигиены. Врач-гигиенист подберёт предметы гигиены с учётом ваших индивидуальных особенностей, даст рекомендации по уходу за полостью рта в домашних условиях.

 

Присутствие приобретенной эмалевой пленки меняет вызванную кислотой эрозию с растворения на процесс размягчения.

1.

Jaeggi, T. & Lussi, A. Распространенность, частота и распространение эрозии. В Erosive Tooth Wear : Karger Publishers. С. 55–73 (2014).

2.

Айкут-Йеткинер, А. и др. . In vitro оценка эрозионного потенциала безалкогольных кислых напитков с модифицированной вязкостью на эмали. Clin Oral Investig. 18 , 769–773 (2014).

Артикул PubMed Google ученый

3.

Барбур, М. Э., Паркер, Д. М., Аллен, Г. К. и Джандт, К. Д. Растворение эмали человека в лимонной кислоте в зависимости от pH в диапазоне 2,30 ≤ pH ≤ 6,30 — исследование наноиндентирования. Европейский журнал устных наук. 111 , 258–262 (2003).

CAS Статья PubMed Google ученый

4.

Ханниг, К., Хамкенс, А., Беккер, К., Аттин, Р. и Аттин, Т. Эрозионные эффекты различных кислот на эмаль крупного рогатого скота: высвобождение кальция и фосфата in vitro . Arch Oral Biol. 50 , 541–552 (2005).

CAS Статья PubMed Google ученый

5.

Лусси А. и Джегги Т. Эрозия — диагностика и факторы риска. Clin Oral Investig. 12 , 5–13 (2008).

Артикул PubMed Central Google ученый

6.

Зеро, Д. Т. и Лусси, А. Эрозия — химические и биологические факторы, важные для практикующего стоматолога. Международный стоматологический журнал. 55 , 285–290 (2005).

Артикул PubMed Google ученый

7.

Доддс, М. В., Джонсон, Д. А. и Йе, К.-К. Польза слюны для здоровья: обзор. J Dent. 33 , 223–233 (2005).

Артикул PubMed Google ученый

8.

Бузалаф, М. А. Р., Ханнас, А. Р. и Като, М. Т. Слюна и эрозия зубов. Журнал прикладной оральной науки. 20 , 493–502 (2012).

Артикул PubMed PubMed Central Google ученый

9.

Риос, Д. и др. . Влияние стимуляции слюны на эрозию эмали человека и быка, подвергнутой или не подвергнутой последующей абразии: исследование in situ / ex vivo . Исследования кариеса. 40 , 218–223 (2006).

CAS Статья PubMed Google ученый

10.

Денни, П. и др. . Протеомы слюнных желез околоушной и поднижнечелюстной / подъязычной железы человека собирают в виде секрета протоков. J Proteome Res. 7 , 1994–2006 (2008).

CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

11.

Hannig, C., Hannig, M. & Attin, T. Ферменты в приобретенной пленке эмали. Европейский журнал устных наук. 113 , 2–13 (2005).

CAS Статья PubMed Google ученый

12.

Ханниг М. и Джойнер А. Структура, функции и свойства приобретенной пленки. Monogr Oral Sci. 19 , 29 (2006).

CAS PubMed Google ученый

13.

Эш А., Малхолланд Ф., Бернетт Г. Р. и Уайлд П. Дж. Структурные и композиционные изменения в слюнной пленке, вызванные воздействием SDS и STP. Биообрастание. 30 , 1183–97 (2014).

CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

14.

Hannig, M. & Balz, M. Влияние in vivo сформированной слюнной пленки на эрозию эмали. Исследования кариеса. 33 , 372–379 (1999).

CAS Статья PubMed Google ученый

15.

Ламкин, М., Аранчилло, А.И Оппенгейм, Э. Временные и композиционные характеристики адсорбции белка слюны на гидроксиапатите. J Dent Res. 75 , 803–808 (1996).

CAS Статья PubMed Google ученый

16.

Хара, А. Т. и Зеро, Д. Т. Потенциал слюны в защите от эрозии зубов. Monogr Oral Sci. 25 , 197–205 (2014).

Артикул PubMed Google ученый

17.

Вукосавлевич, Д., Кустодио, В., Бузалаф, М. А., Хара, А. Т. и Сикейра, В. Л. Приобретенная пленка как модулятор эрозии зубов. Arch Oral Biol. 59 , 631–8 (2014).

CAS Статья PubMed Google ученый

18.

Вукосавлевич Д., Кастодио В.& Siqueira, W. L. Белки слюны как предикторы и средства контроля здоровья полости рта. J Cell Коммунальный сигнал. 5 , 271–5 (2011).

Артикул PubMed PubMed Central Google ученый

19.

Эйзенбургер, М. Степень потери минералов в размягченной эмали человека после кислотной эрозии, измеренная с помощью химического анализа. J Dent. 37 , 491–494 (2009).

CAS Статья PubMed Google ученый

20.

Ионта, Ф. К. и др. . In vitro оценка составов искусственной слюны при начальной реминерализации эрозии эмали. J Dent. 42 , 175–179 (2014).

CAS Статья PubMed Google ученый

21.

Zwier, N. и др. . Параметры слюны и эрозионный износ у подростков. Исследования кариеса. 47 , 548–552 (2013).

CAS Статья PubMed Google ученый

22.

Cheaib, Z. & Lussi, A. Влияние приобретенной модификации пленки эмали на начальную эрозию зубов. Исследования кариеса. 45 , 107–112 (2011).

CAS Статья PubMed Google ученый

23.

Cheaib, Z. & Lussi, A. Роль амилазы, муцина, IgA и альбумина в буферной способности белка слюны: пилотное исследование. Журнал биологических наук. 38 , 259–265 (2013).

CAS Статья PubMed Google ученый

24.

Кильбасса, А., Ошгер, У., Шульте-Монтинг, Дж. И Мейер-Люкель, Х. Микрорадиографическое исследование влияния белков слюны на in vitro деминерализацию эмали коров. Журнал оральной реабилитации. 32 , 90–96 (2005).

CAS Статья PubMed Google ученый

25.

Хара, А. Т., Гонсалес-Кабесас, К., Крит, Дж. И Зеро, Д. Т. Эффект заменителей слюны человека в циклической модели эрозии и истирания. Европейский журнал устных наук. 116 , 552–556 (2008).

Артикул PubMed Google ученый

26.

Leung, V.-H. И Дарвелл Б. Искусственная слюна для исследований in vitro стоматологических материалов. J Dent. 25 , 475–484 (1997).

CAS Статья PubMed Google ученый

27.

Шиппер, Р. Г., Силлетти, Э. и Вингерхоедс, М. Х. Слюна как материал исследования: биохимические, физико-химические и практические аспекты. Arch Oral Biol. 52 , 1114–1135 (2007).

CAS Статья PubMed Google ученый

28.

Amaechi, B. & Higham, S. In vitro реминерализация эродированных поражений эмали слюной. J Dent. 29 , 371–376 (2001).

CAS Статья PubMed Google ученый

29.

Амаечи, Б., Хайэм, С. и Эдгар, У. Методы создания зубных эродированных поражений in vitro . Журнал оральной реабилитации. 26 , 97–102 (1999).

CAS Статья PubMed Google ученый

30.

Гибсон, Дж. И Били, Дж. А. Натуральная и синтетическая слюна: стимулирующий объект. Обзоры биотехнологии и генной инженерии. 12 , 39–62 (1994).

CAS Статья PubMed Google ученый

31.

Эйзенбургер М., Адди М., Хьюз Дж. И Шеллис Р. Влияние времени на реминерализацию эмали синтетической слюной после эрозии лимонной кислотой. Исследования кариеса. 35 , 211–215 (2001).

CAS Статья PubMed Google ученый

32.

Фрэнсис, К. А., Гектор, М. П. и Проктор, Г. Б. Осаждение определенных белков путем замораживания-оттаивания слюны человека. Arch Oral Biol. 45 , 601–606 (2000).

CAS Статья PubMed Google ученый

33.

Cheaib, Z. & Lussi, A. Влияние приобретенной модификации пленки эмали на начальную эрозию зубов. Caries Res. 45 , 107–12 (2011).

CAS Статья PubMed Google ученый

34.

Холл, А. и др. . Влияние слюны на эрозию эмали и дентина. J Dent. 27 , 333–339 (1999).

CAS Статья PubMed Google ученый

35.

Hellwig, E., Lussi, A. & Goetz, F. Влияние слюны человека на развитие искусственных эрозий. Caries Res. 47 , 553–8 (2013).

CAS Статья PubMed Google ученый

36.

Meurman, J. & Frank, R. Исследование влияния слюнной пленки на эрозию эмали с помощью сканирующей электронной микроскопии. Исследования кариеса. 25 , 1–6 (1991).

CAS Статья PubMed Google ученый

37.

Некрашевич Ю. и Штёссер Л. Защитное влияние экспериментально сформированной слюнной пленки на эрозию эмали. Исследования кариеса. 37 , 225–231 (2003).

Артикул PubMed Google ученый

38.

Веттон С., Хьюз Дж., Ньюкомб Р. и Эдди М. Влияние слюны, полученной от разных людей, на эрозию эмали и дентина. Исследования кариеса. 41 , 423–426 (2007).

CAS Статья PubMed Google ученый

39.

Wetton, S., Hughes, J., West, N. & Addy, M. Время воздействия слюны на эмаль и дентин для защиты от эрозии: исследование in vitro . Исследования кариеса. 40 , 213–217 (2006).

CAS Статья PubMed Google ученый

40.

Мередит, Н., Шерифф, М., Сетчелл, Д. и Свансон, С. Измерение микротвердости и модуля Юнга человеческой эмали и дентина с использованием техники вдавливания. Arch Oral Biol. 41 , 539–545 (1996).

CAS Статья PubMed Google ученый

41.

Паркинсон, К. Р., Шахзад, А. и Рис, Г. Д. Начальные стадии эрозии эмали: исследование методом атомно-силовой микроскопии in situ . Журнал структурной биологии. 171 , 298–302 (2010).

CAS Статья PubMed Google ученый

42.

Dawes, C. & Dong, C. Скорость потока и электролитный состав цельной слюны, полученные при использовании жевательных резинок, содержащих сахарозу и не содержащих сахара. Arch Oral Biol. 40 , 699–705 (1995).

CAS Статья PubMed Google ученый

43.

Ganss, C., Klimek, J., Schäffer, U. & Spall, T. Эффективность двух мер фторирования на прогрессирование эрозии эмали и дентина человека in vitro . Исследования кариеса. 35 , 325–330 (2001).

CAS Статья PubMed Google ученый

44.

Ван Х., Мегерт Б., Хеллвиг Э., Нойхаус К. В. и Лусси А. Предотвращение эрозии с помощью новых агентов. J Dent. 39 , 163–70 (2011).

CAS Статья PubMed Google ученый

45.

Hay, D. Выделение из околоушной слюны человека кислого пептида, богатого тирозином, который проявляет высокое сродство к гидроксиапатитным поверхностям. Arch Oral Biol. 18 , 1531–1541 (1973).

CAS Статья PubMed Google ученый

46.

Косорич, Дж., Уильямс, Р. А. Д., Гектор, М. П. и Андерсон, П. Синтетический пептид на основе природного белка слюны снижает деминерализацию в модельных системах для лечения кариеса и эрозии зубов. Международный журнал исследований пептидов и терапии. 13 , 497–503 (2007).

CAS Статья Google ученый

47.

Klimek, J., Hellwig, E. & Ahrens, G. Фторид, поглощенный зубным налетом, подлежащей эмалью и чистой эмалью от трех фторидных соединений in vitro . Исследования кариеса. 16 , 156–161 (1982).

CAS Статья PubMed Google ученый

48.

Meyer-Lueckel, H., Cölfen, H., Verch, A. & Tschoppe, P. Влияние заменителей слюны на основе карбоксиметилцеллюлозы с различной степенью насыщения фосфатами кальция на искусственные поражения эмали. Исследования кариеса. 44 , 127–134 (2010).

CAS Статья PubMed Google ученый

49.

Уркхарт Д. и Фаулер К. Обзор использования полимеров в заменителях слюны для облегчения симптомов ксеростомии. Журнал клинической стоматологии. 17 , 29–33 (2006).

PubMed Google ученый

50.

Батиста, Г. Р., Торрес, К. Р. Г., Сенер, Б., Аттин, Т. и Виганд, А. Составы искусственной слюны по сравнению с предварительной обработкой слюны человека в экспериментах по эрозии зубов. Исследования кариеса. 50 , 78–86 (2016).

CAS Статья PubMed Google ученый

51.

Амеронген А. Н., Одеркерк К. и Дриссен А. Роль муцинов цельной слюны человека в защите эмали зубов от деминерализации in vitro . Исследования кариеса. 21 , 297–309 (1987).

Артикул Google ученый

52.

Фезерстон Дж., Берман Дж. И Белл Дж. Влияние компонентов цельной слюны на деминерализацию эмали in vitro . критических обзора по оральной биологии и медицине. 4 , 357–362 (1993).

CAS Статья Google ученый

53.

Hannig, M. et al. . Защитный эффект in situ формирует кратковременную слюнную пленку. Arch Oral Biol. 49 , 903–910 (2004).

CAS Статья PubMed Google ученый

54.

Schlüter, N., Hara, A., Shellis, R. & Ganss, C. Методы измерения и характеристики эрозии эмали и дентина. Исследования кариеса. 45 , 13–23 (2011).

Артикул Google ученый

55.

Hara, A. T. & Zero, D. T. Анализ эрозионного потенциала содержащих кальций кислых напитков. Европейский журнал устных наук. 116 , 60–65 (2008).

Артикул PubMed Google ученый

56.

Аттин, Т., Мейер, К., Хеллвиг, Э., Бухалла, В. и Леннон, А. Влияние минеральных добавок лимонной кислоты на эрозию эмали. Arch Oral Biol. 48 , 753–759 (2003).

CAS Статья PubMed Google ученый

57.

Лас Касас, Э., Бастос, Ф., Годой, Г. и Буоно, В. Определение характеристик износа эмали и шероховатости поверхности с помощью трехмерной профилометрии. Tribology International. 41 , 1232–1236 (2008).

CAS Статья Google ученый

58.

Сильверстоун, Л., Сакстон, К., Догон, И. и Фейерсков, О. Вариации в картине кислотного травления зубной эмали человека, исследованной с помощью сканирующей электронной микроскопии. Исследования кариеса. 9 , 373–387 (1975).

CAS Статья PubMed Google ученый

59.

Филд, Дж., Уотерхаус, П. и Герман, М. Количественная оценка и оценка поверхностных изменений твердых тканей зубов in vitro . J Dent. 38 , 182–190 (2010).

CAS Статья PubMed Google ученый

60.

Бауман, Т., Козик, Дж., Лусси, А. и Карвалью, Т. Защита от эрозии, обеспечиваемая цельной человеческой слюной, диализованной слюной и искусственной слюной. Научные отчеты . 6 (2016).

(PDF) Используется слюна и зубной налет — A Review

(Embery et al, 1986).Аппликаторы мини-губки Dental

, пропитанные

2%

SDS, также использовались для

сбора пленки in vivo (Carlen et al,

1998).

Наша лаборатория разработала

технику с использованием гидрофильных мембран из ПВДФ

, удерживаемых с помощью ватных плоскогубцев

(Yao et al, 2001), которая также доказала свою эффективность и эффективность

по сравнению с

пациентом по сравнению с

с механическим масштабированием. Отдельные

коллекций из 20 поверхностей щечного зуба

обычно дают от 10 до 15

мкг белка, что сопоставимо с результатами

с помощью метода масштабирования

(Al-Hashimi and Levine,

1989).

Материал, собранный с помощью этого метода

in vivo через 2 часа после чистки зубов

, будет обозначаться как

«свежая пленка

7

‘.

Asx

Ser

Glx Pro Metly Ala Cys He

Аминокислотный остаток

Leu Tyr Phe His Lys Arg

Формирование пелликул

Ультраструктурные исследования показывают, что

обнаруживаемый слой пелликулы

адсорбируется на эмалевых пластинах уже в начале

за одну минуту воздействия.

оральная среда (Hannig, 1999).В нескольких публикациях

предполагается, что образование пленок достигает равновесия между адсорбцией

и десорбцией белка в течение 2 часов. Дальнейшего увеличения количества

аминокислот не было обнаружено через 90 минут при анализе

образцов, собранных через 30, 60, 90 и 120 минут (Sonju и

Rolla, 1973). Равновесие наблюдали через 90 мин с помощью рентгеновских фотоэлектронных спектроскопических исследований

(Кубоки и др., 1987). Эксперимент по напылению аргоном

показал, что образование пленки

, по-видимому, завершилось через 45 минут, а

не наблюдалось в течение 10 часов (Skjorland et al, 1995).Бактерии были обнаружены на эмалевых шинах, которые носили в полости рта через 4 часа (Lie,

1975).

Следовательно, двухчасовая пленка практически не содержит налета

.

Ультраструктура пленки

Электронная микроскопия широко использовалась для исследования структуры

полученной пленки эмали. В большинстве исследований

сообщается, что толщина пленки на самоочищающихся поверхностях составляет от 30 до 100

нм (Tinanoff et al, 1976; Hannig, 1989).

Сканирующая и просвечивающая электронная микроскопия показала, что пленка

не является однородной пленкой, покрывающей эмаль или диски

гидроксиапатита, а демонстрирует отчетливую структуру. Обширное исследование

было проведено Ли (Lie, 1977). Он прикрепил

гидроксиапатитовых шин к зубному ряду и исследовал образцы

после различных периодов времени образования пленки. Через 2 часа было обнаружено

гранулированных структур диаметром от 25 до 125 нм.Иногда эти глобулы соединялись с поверхностью гидроксиапатита

стебельчатыми структурами. Через 24 часа глобулы

оказались покрытыми фибриллярной пленкой, достигающей толщины

550-900 нм. Глобулярные структуры в фибриллярной пленке

были меньше, их диаметр составлял от 5 до 70 нм. Через 12 часов

поверхность пленки стала относительно гладкой, и глобулярные и

фибриллярных структур больше не наблюдались.Однако наблюдалась зернистая структура

, а в середине пленки можно было обнаружить электронно-плотное расслоение

линий (Lie, 1977). Другие

исследователей также наблюдали такие глобулярные и гранулярные структуры

(Hannig, 1989; Schiipbach et al, 1996). Просвечивающие электронные микроскопы

дополнительно показывают, что пленка не ограничивается

поверхностью зуба, а проникает в эмаль нитевидным образом

(Meckel, 1965; Tinanoff et al, 1976; Hannig, 1989).Эта так называемая подповерхностная пленка

особенно выражена на аппроксимационных поверхностях

(Leach and Saxton, 1966). Зубной налет может быть покрыт пленкой

, похожей на пленку эмали (Tinanoff et al, 1976).

Рис.

1 — Аминокислотный анализ приобретенных пленок эмали. Количество индивидуальных аминокислотных остатков составляет

в молях • 1000 моль ~

1

от общего количества аминокислот. Белые столбики представляют старые пленки, полученные кислотной обработкой

удаленных зубов.Черные столбики представляют собой свежеобразованные двухчасовые пленки. Слева направо столбцы показывают данные

, представленные Leach et al. (1967), Армстронг и Хейворд (1968), Мэйхолл (1970), Белкорт и др. (1974), Sonju и

,

Rolla (1973), Аль-Хашими и Левин (1989), Rykkeand Sonju (1991) и Zehnder et al. (2000).

Химический состав

приобретенного слоя эмали

Гистохимическое окрашивание позволило предположить, что пленка имеет белковую природу

.Такие результаты были подтверждены наблюдением

о потере пленки при инкубации зубов с протеолитическими ферментами

(Dobbs, 1932; Meckel, 1965). В самом деле, химический состав

старых образцов пленок составлял

из 46% аминокислот, 2,7% гексозаминов и 14% общих углеводов

(Армстронг, 1967).

По липидам в пленке

доступна только предварительная информация. Основными фосфолипидами в пленке являются

фосфатидилхолин, фосфатидилэтаноламин и

сфингомиелин.Гликолипиды и нейтральные липиды были обнаружены как лунка

(Slomiany et al, 1986). На сегодняшний день только присутствие

фосфатидилхолина подтверждено другими исследователями

(Kautsky and Featherstone, 1993).

Углеводный состав

Образцы «старой пленки»

7

всплыли из удаленных зубов

положительно окрашены ПАСК (Schiile, 1964). Поэтому предполагалось, что пленка

состоит из муцинов, и исследователи попробовали

анализировать углеводы.В старой пленке глюкоза, манноза, галактоза

,

и глюкозамин могут быть идентифицированы с помощью бумажной хроматографии

. В образцах наддесневого камня также было обнаружено

рибозы, предположительно бактериального происхождения

(Schiile, 1964). Mayhall сообщил о

углеводном составе старой пленки, состоящей из 20% глюкозы,

27%

галактозы, 9% манозы, 18% фукозы, 18% глюкозамина,

и 14% галактозамина (Mayhall and Butler, 1976).Свежая пленка

также содержит большое количество глюкозы. Sonju

сообщил о 67% глюкозы, 18% глюкозамина, 9% галактозы и

6% маннозы (Sonju, 1975). Высокое содержание глюкозы в пленке

изначально не было хорошо изучено, потому что этот сахар

редко встречается в гликопротеинах. Поскольку в старой и свежей пленке

легко растворимый материал вымывается во время сбора

, большинство обнаруженных сахаров, вероятно, происходит из макромолекул или гликозилированных белков.Экспериментальная работа

Хэя помогла выяснить происхождение углеводов

в пленке (Hay, 1969). Он сравнил

сахаров, присутствующих в белках супернатанта цельной слюны

, которые специфически связываются с гидроксиапатитом, с

, присутствующими в пленке. Белок, связанный с гидроксиаптатитом

, содержал большое количество галактозы, немного глюкозы и

маннозы и снова большое количество фукозы, что указывает на

Adv Dent Res 14: 22-28, декабрь 2000 г.

Saliva and Dental Pellicle

23

гостем 13 июля 2011 г. Только для личного пользования.Никакое другое использование без разрешения. Adr.sagepub.com Загружено с

Слюнная пленка на стоматологических биоматериалах — Experts @ Minnesota

@article {ee2e5a5bf7834ae18f05a977b2cf69c1,

title = «Слюнная пленка

«, аннотация

«Биоматериал

на зубной пленке» слюнная пленка, клейкий слой, образующийся в результате адсорбции компонентов слюны на зубах и стоматологических биоматериалах, имеет прямое влияние на основные результаты стоматологии. Здесь мы даем обзор процессов образования слюнных пленок, уделяя особое внимание стоматологическим биоматериалам.Мы описываем и критикуем ряд методов измерения слюнных пленок. Мы также обсуждаем факторы, которые могут влиять на образование слюнных пленок, и неоднородность опубликованной литературы, описывающей образование слюнных пленок на стоматологических биоматериалах. Наконец, мы исследуем множество эффектов слюнных пленок на стоматологические биоматериалы и подчеркиваем их влияние на критерии проектирования стоматологических биоматериалов. Дальнейшие исследования могут привести к разработке рационально разработанных стоматологических биоматериалов для контроля слюнной пленки и улучшения функции материала и результатов лечения пациентов.»,

keywords =» Стоматологические биоматериалы, Стоматология, Адсорбция белка, Слюнная пленка, Поверхность «,

author =» Фишер, {Николас Г.} и Конрадо Апарисио «,

note =» Информация о финансировании: NGF выражает признательность за поддержку со стороны NIH-NIDCR T90-DE0227232 и стипендия 3M по науке и технологиям. Ответственность за этот контент полностью лежит на авторах и не обязательно отражает официальную точку зрения Национальных институтов здравоохранения. Информация о финансировании: NGF благодарит NIH-NIDCRT90-DE0227232 за поддержку и стипендию 3M по науке и технологиям.Ответственность за этот контент полностью лежит на авторах и не обязательно отражает официальную точку зрения Национальных институтов здравоохранения. Авторские права издателя: {\ textcopyright} 2021 Elsevier BV «,

год =» 2021 «,

месяц = ​​апр,

doi =» 10.1016 / j.colsurfb.2021.111570 «,

language =» English (US) » ,

volume = «200»,

journal = «Коллоиды и поверхности B: биоинтерфейсы»,

issn = «0927-7765»,

publisher = «Elsevier»,

}

Что такое пелликул? (с иллюстрациями)

Зубная пленка — это отложение органической пленки, состоящей из белка, которая образуется на поверхности зубной эмали.Пелликулы образуются через несколько секунд после чистки зубов в результате избирательного впитывания элементов слюны на поверхность зубов. Хотя это нормальная биологическая функция, это образование является первым этапом развития бляшек.

Буквально считающиеся «кожей» зубов, пленки также известны как приобретенные слюнные пленки, приобретенные пленки и пленки эмали.Хотя точный состав, а также структура остаются неизвестными, ученые знают, что пленки состоят из белковых компонентов, таких как лизоцим, иммуноглобулин А, амилаза, протеины с пролином и муцины слюны. Все поверхности зубов покрыты пленками, которые впоследствии заселяются бактериями.

Естественное развитие пленки предназначено для защиты зубов от кислот.Однако он также дает возможность бактериям цепляться за зубы. Бактерии, которые могут прикрепляться к пленке, включают Actinomyces viscosus, Streptococcus sanguis и Streptococcus mutans. Микробы прикрепляются не к минералам в зубах, а к пленкам. Считающиеся основными основоположниками зубного налета, эти бактерии взаимодействуют с компонентами пленки, создавая благоприятный климат для образования зубного налета.

Пелликулы не живые и не реагируют на бактерии.Это делает вероятным, что бактерии прикрепляются к ним во время кормления, что может объяснить выступы или зубчатый вид на пленках. В крайних случаях бактерии могут поглотить все пленки на зубах пациента.

Пелликулы прочно прикреплены к зубам, но их можно удалить путем истирания.Обычно это достигается, если стоматолог или гигиенист проводит тщательную полировку или использует зубную фрезу, которая является разновидностью сверла для стоматологической бормашины. Обычная чистка зубов обычно не приводит к истиранию, достаточному для удаления пленки. Даже после удаления обычно пленки просто восстанавливаются в течение двух часов.

Обычно очень тонкие, иногда в некоторых местах пленки могут быть толстыми.Они подвержены износу и обычно являются самыми тонкими на окклюзионных поверхностях зубов, где происходит скрежетание и жевание. Как прозрачное покрытие, обычно находящееся под зубным налетом, пленка не видна невооруженным глазом; однако это все еще можно увидеть. Стоматологи могут попросить своих пациентов использовать раствор, состоящий из раскрывающих материалов, чтобы сделать пленку видимой. Затем это можно увидеть как светлое пятно на поверхности зубов пациента.

Оптический доступ к слюнной пленке

1.

Введение

Селективная адсорбция специфических биополимеров слюны на поверхности эмали приводит к образованию приобретенной слюнной пленки. ¹ Слой адсорбированного белка можно рассматривать как динамическую биопленку, которая регулирует и модулирует взаимодействия на границе раздела между поверхностью зуба и полостью рта. ^{1, 2, 3, 4, 5} Пленка служит смазкой, защищая зубной ряд от истирания и истирания. ¹ Кроме того, слюнная пленка может защищать от деминерализации твердых тканей зуба, вызванной воздействием кислоты. ^{1, 2, 3, 4, 5} Адсорбированные пелликулярные фосфопротеины и муцины снижают растворимость поверхности эмали, действуя как селективная мембрана и регулируя не только диффузию ионов кальция и фосфата, но и кислотных агентов. ^{1, 2, 3, 4, 5} В дополнение к своим защитным функциям по смазке, ингибированию деминерализации и работе в качестве диффузионного барьера против химического воздействия на эмаль, пленка может действовать как резервуар агентов, способствующих реминерализации.Возраст созревания пленки, когда она может эффективно подавлять эрозионную активность, остается неясным.

Биопленка полости рта содержит множество факторов, важных для микробной экологии полости рта и свойств поверхности тканей. Он непосредственно участвует в этиологии патологий мягких тканей полости рта, включая заболевания пародонта, обеспечивая место связывания патогенных бактерий. ^{6, 7} Морфология слоя биопленки полости рта, по-видимому, влияет на связывание бактерий с поверхностью зуба. ^{6, 7}

Текущие характеристики пленки в отношении ее состава, архитектуры и химии основаны на исследованиях in vitro или ex vivo . Неинвазивная in situ характеристика и картирование слюнной пленки остаются неуловимыми. Влияние определенных событий в полости рта, таких как прием пищи, гигиена полости рта, профилактические, восстановительные и фармакологические средства, на присутствие, структуру и свойства слюнных пленок in vivo, структуру и свойства в значительной степени неизвестны.Основным препятствием была неспособность неинвазивно охарактеризовать in vivo наличие, структуру и динамику приобретенной пленки слюны. Тем не менее, такая возможность имеет решающее значение для лучшего понимания орального патогенеза, профилактики и лечения.

Оптическая когерентная томография (ОКТ) — это оптический метод с высоким разрешением, который позволяет минимально инвазивную визуализацию приповерхностных аномалий в сложных тканях. Его принципы описаны в литературе. ^{8, 9, 10, 11, 12, 13} Изображения поперечных сечений тканей создаются в реальном времени с разрешением, близким к гистологическому (приблизительно От 3 до 10 мкм по нашей современной технологии). Это позволяет in vivo неинвазивных изображений макроскопических характеристик поверхностных и подповерхностных тканей. Двумерные изображения могут быть объединены для создания трехмерных изображений, которые можно разделить и манипулировать различными способами. In vivo ОКТ-изображения получают за секунды или меньше с помощью ручного зонда, поэтому их можно легко использовать в клинических условиях.Более высокое разрешение in vivo ОКТ-изображений возможно с помощью оптической когерентной микроскопии (OCM). ^{14, 15} OCT или OCM можно комбинировать с in vivo многофотонной микроскопией (MPM), создавая изображения с высоким разрешением конкретных компонентов ткани и флуоресценции с использованием многих длин волн света. ¹⁶

Целью этого исследования было изучить использование мультимодальной неинвазивной визуализации для визуализации, характеристики и количественной оценки приобретенной пленки слюны.Развитие такой способности в долгосрочной перспективе послужит улучшению диагностических, профилактических и интервенционных возможностей в полости рта и обеспечит лучшее понимание физиологических и патологических процессов, связанных с твердыми тканями полости рта.

2.

Материалы и методы

2.1.

Препарат для зубов

Использовали 15 моляров человека без кариеса и передних зубов со здоровой гладкой поверхностью, не имевших клинических и рентгенологических данных. Они были извлечены недавно из-за тяжелого периодонтита.Эти образцы были очищены и отполированы суспензией пемзы и ватным диском для удаления органических загрязнителей. 30 эмалевых блоков были изготовлены из гладких поверхностей каждого зуба с использованием алмазного диска с водяным охлаждением (DynaFlex®, NTI, Германия), подключенного к низкоскоростному микродвигателю (Rite Torque V, Rite Dent, Майами, Флорида) (Таблица 1 ). Чтобы удалить любой мелкий мусор или остатки бактерий, блоки эмали стерилизовали 50% этанолом. 30 мин, промыть проточной дистиллированной водой в течение 20 минут, а затем поместите ультразвуковой очиститель на 30 минут.

Таблица 1

Подготовка проб. Общее количество образцов зубов в исследовании: n = 30 .

Цель	Среда для инкубации	Время инкубации (мин)					Число образцов
Время визуализации — рост слюнных частиц	Только слюна	0 49	1048	0 49	1048	0 49	1048 24 ч	15
	Только дистиллированная вода (контроль)							15

Каждый образец фиксировали в силиконовой форме (Vinyl Polysiloxane Kit, Defend®, Mydent International, Hauppauge, New York) для обеспечения стабильного положения во время инкубации и визуализации (рис.1 ) и отмечены двумя острыми точками масляными чернилами для обеспечения точного воспроизводимого множественного изображения в одном и том же месте.

Рис. 1

Пробоподготовка. Набор зубов в силиконовой форме для ОКТ-визуализации. Два маркера масляными чернилами указывают область для изображения.

2.2.

Сбор экспериментальной слюны

Один здоровый донор ( 35-летний мужчина) с хорошим системным здоровьем и здоровьем полости рта (без каких-либо лекарств или особых диетических привычек, заболеваний слюнных желез, кариеса, патологии пародонта и дисфункций слюнных желез) использовался в качестве источника образцов слюны для устранения вариабельности образцы.Человек дал письменное информированное согласие до участия в этом исследовании, которое было одобрено Калифорнийским университетом, Ирвинское IRB (одобрение 2002-2805). Чтобы обеспечить уравновешенную среду полости рта, донор воздерживался от еды, питья и чистки зубов, по крайней мере, 2 часа до исследования. Кроме того, донор воздерживался от использования фторированных средств для чистки зубов и жидкости для полоскания рта по крайней мере 12 часов до взятия пробы. Донору разрешили регулярно проводить процедуры гигиены полости рта (чистка щеткой и зубной нитью) сразу после завтрака в день эксперимента.

Околоушную и подчелюстную / подъязычную слюну собирали с помощью ледяной стерильной центрифужной пробирки. (15 мл) с использованием световой стимуляции 2% -ной лимонной кислотой после жевания куска парафина (3M Company, Миннеаполис, Миннесота). Сбор всегда производился утром между 9 и 10 часами утра, чтобы минимизировать влияние суточных изменений состава слюны. После сбора несколько миллилитров цельной слюны были выброшены, чтобы минимизировать количество орального мусора.

Отобранную слюну осветляли центрифугированием при 1000 г × для 20 минут для удаления клеточного мусора.Прозрачный супернатант смешивали с 0,02% азидом натрия для предотвращения роста бактерий и хранили при 4 ° C в холодном помещении перед экспериментом (рис. ). Все образцы слюны использовались в день сбора.

Рис. 2

Препарат слюны. Осветленная слюна после центрифугирования. В этом исследовании, Было выполнено центрифугирование 1000 g × 20 мин, и полученный прозрачный супернатант (красная стрелка) был собран с использованием осторожного пипетирования для предотвращения нарушения осадка (желтая стрелка).(Только в цвете онлайн.)

2.3.

Формирование пелликул

Экспериментальные пелликулы формировали инкубацией в зависимости от времени (0, 10, 30, 60, 120 мин, и 24 ч) образцов зубов с 5 мл слюны. Каждый образец инкубировали с собственной аликвотой слюны при 37,5 ° C, чтобы избежать взаимодействия между образцами зубов. Моменты времени для инкубации были выбраны на основе литературы и определяющей роли, которую играет возраст пленки в определении реакции зубных рядов in vivo на кислотную атаку.После инкубации излишки слюны и неплотно связанные белки были удалены с поверхности зуба коротким и осторожным способом. 10-секундное ополаскивание дистиллированной водой, чтобы не повредить формирующуюся слюнную пленку.

Образцы зубов контрольной группы инкубировали в тех же условиях, но в дистиллированной воде, а не в слюне. Во время инкубации, будь то в слюне или дистиллированной воде, все образцы осторожно перемешивали при 10-минутные интервалы.

2.4.

Визуализация

В дополнение к традиционной ОКТ, для улучшения разрешения и специфичности изображения использовалась мультимодальная визуализация ОСМ, связанная с многофотонной микроскопией (МФМ).Флуоресцеин и красители Coolblue (Coolblue®, Pfizer, New York) использовали в качестве оптических контрастных агентов во время флуоресцентной визуализации с помощью MPM. Каждый краситель смешивали со слюной в объемном соотношении 1: 100. Изображения генерации второй гармоники (SHG) и двухфотонно-возбужденной флуоресценции (TPEF) были получены для сравнения с изображениями OCM.

Для обеспечения точной перестановки во время последовательных событий повторной визуализации силиконовые и акриловые формы были стабильно закреплены на регулируемом столике визуализации с помощью держателя, а прицельный луч визуализации сканировался по линии между двумя маркерами масляными чернилами.

Во время получения изображений MPM и OCM все образцы были защищены тонкой прозрачной стеклянной крышкой с герметизацией границ с использованием силиконовых материалов для уменьшения эффектов обезвоживания. Кроме того, Полиэтиленовая пленка толщиной 100 мкм с Окно размером 3 × 3 мм было расположено под местом визуализации, чтобы предотвратить прямой контакт между пленкой слюны и стеклом для визуализации (рис. 3). ).

Рис. 3

Чашка для визуализации, специально разработанная для визуализации слюнных пленок.Для защиты от обезвоживания и механического раздражения формирующейся пленки слюны край чашки для визуализации герметизировали силиконом (вверху), а край окна был защищен Пластиковая пленка толщиной 100 мкм. Зазор между стеклом для визуализации и пленкой слюны обеспечивает неповрежденную и неизменную пленку слюны на протяжении всей визуализации.

3.

Результаты

3.1.

Развитие слюнных пелликулов по времени

3.1.1.

Изображения оптической когерентной томографии

Со временем образцы, инкубированные слюной, показали постепенное увеличение поверхностного сигнала на виде сверху трехмерных реконструированных ОКТ-изображений [Рис.4b ]. Это означает развитие поверхностных пленок в образцах, инкубированных в слюне более 24ч. Напротив, образцы, инкубированные в дистиллированной воде, не показали изменения поверхностного сигнала с течением времени [Рис. 4a].

Рис. 4

Временные двухмерные ОКТ-изображения, извлеченные из трехмерных восстановленных изображений. (а) Вид сверху поверхности эмали, инкубированной в дистиллированной воде в течение 10, 30 и 60 мин, без изменений с течением времени. (b) Вид сверху поверхности эмали, инкубированной в слюне в течение 10, 30 и 60 мин показывает развитие слюнной пленки.

3.1.2.

Оптическая когерентная микроскопия

Изображения ОКМ были наложены на изображения отражения и второй гармоники, полученные при микроскопии. Флуоресцеин и Coolblue (Coolblue®, Pfizer, New York) использовали в качестве красителя для флуоресцентных изображений. После После 120 мин инкубации образцы, инкубированные в слюне, показали четко различимый слой усреднения. Толщиной 20 мкм [рис. 5c и 5d ]. Толщина изменялась между образцами и внутри образца. Образцы, инкубированные в дистиллированной воде, не продемонстрировали какого-либо четкого слоя между зубом и водой [Рис.5а и 5б].

Рис. 5

ОКМ изображения пленки слюнной железы. Изображения ОКМ (зеленый сигнал) были наложены на флуоресцентные (красный сигнал) и микроскопические изображения второй гармоники (синий сигнал). (а) Вид сверху 3-D реконструированного изображения ОКМ инкубированного в дистиллированной воде образца. После Инкубация 120 мин, отличия между зубами и водой нет. Сигнал светло-розового цвета связан с флуоресценцией стекла изображения (черные стрелки). (б) Оптический разрез трехмерного изображения, обеспечивающий вид сбоку (а).(c) Вид сверху 3-D реконструированного изображения ОКМ инкубированного слюны образца. Отчетливый слой пленки между зубом и слюной отчетливо виден (белые стрелки). (d) Оптический разрез трехмерного изображения, обеспечивающий вид сбоку (c). Пленка средней толщины На поверхности зуба хорошо видно 20 мкм (белые стрелки). (Только в цветном режиме онлайн.)

3.1.3.

Многофотонная микроскопия

После 120 мин инкубации в слюне, слой более На границе между зубом и слюной была видна толщина 10 мкм [Рис.6д, 6д, 6ф ]. Стержневые структуры эмали, которые были видны до инкубации со слюной, постепенно покрывались развивающимся вышележащим слоем пленки. В контрольных образцах, инкубированных в дистиллированной воде [рис. 6a, 6b, 6c], стержневые структуры эмали оставались видимыми на протяжении всего исследования.

Рис. 6

MPM-изображения пленки слюны. (а) Зуб, инкубированный в дистиллированной воде для 120мин. Эмалевые стержни отчетливо видны на этом трехмерном реконструированном изображении вида сверху. (б) Оптический разрез трехмерного изображения, обеспечивающий вид сбоку (а) и подтверждающий отсутствие пленки.(c) График изолинии (b). Крайняя зона эмали показывает высокую интенсивность сигнала. (d) Зуб, инкубированный в слюне для 120мин. Из-за развития вышележащего слоя пленки стержни эмали в основном закрыты на этом изображении вида сверху. (e) Оптический разрез трехмерного изображения, обеспечивающий вид сбоку (d). Слой пленки покрывает внешнюю поверхность зуба. (f) График изолинии (e). Новый сигнал на внешней поверхности зуба, который не наблюдается в образцах, инкубированных в воде (c), предполагает наличие слюнной пленки.

3.1.4.

Рост и развитие пленки

Со временем в развивающихся слоях пленки наблюдалось созревание начальных «семян» глобулярной пленки. Изображения показали наличие и рост островков пленки (рис. 7 и 8). ). Ранние глобулярные островки пленок различались по размеру и, по-видимому, были случайным образом распределены по поверхности образцов (рис. 7). Со временем количество и размер этих островков постепенно увеличивались [рис. С 8а по 8d]. В конце концов, как только островки слились, слой пленки покрыл всю поверхность образца [Рис.8d].

Рис. 7

Рост и развитие пленки. Изображения OCM после 120-минутная инкубация в слюне. Хорошо виден шаровидный рост пленки. (а) Вид сверху 3-D реконструированного изображения. Флуоресцеин в дентинных канальцах (белые стрелки) и пленке (желтые стрелки) показывает красный сигнал. (b) Оптический разрез восстановленного изображения сбоку. Острова пелликул также видны на более позднем снимке (желтый кружок). (Только в цвете онлайн.)

Рис. 8

Постепенный рост и развитие пленки (белые стрелки) на одном образце зуба.Вид сверху 3-D реконструированных изображений MPM в моменты времени прогрессивной инкубации слюны. а) 10-минутная инкубация. (б) 30-минутная инкубация. (c) 60-минутная инкубация. (г) 24-часовая инкубация. Синий сигнал исходит от зуба и слюны; розовый и красный сигналы исходят от слюнной пленки. Со временем количество и диаметр островков пленки постепенно увеличивался. (Только в цвете онлайн.)

4.

Обсуждение

Секреция слюны — сложный процесс, при этом большая часть слюны по объему выделяется главными слюнными железами, а остальное количество — второстепенными.Слюна содержит множество факторов, важных для микробной экологии полости рта, образования биопленок и здоровья. Потеря слюноотделения может привести к резкому разрушению зубов. ^{1, 2} Этот момент становится все более важным, учитывая высокую кариесогенность современной западной диеты не только из-за большого количества ферментируемых углеводов, но также из-за того, что прием пищи происходит с высокой частотой в течение дня. Формирование пелликулов — это динамический процесс, на который постоянно влияют процессы адсорбции-десорбции, структурная модификация адсорбированных молекул микробными ферментами или ферментами хозяина и межмолекулярный комплекс с другими макромолекулами. ^{1, 2}

Слюнная пленка служит для защиты зубной эмали от неблагоприятных условий, которые включают резкие изменения pH и температуры в сочетании с частыми повторяющимися механическими нагрузками во время жевания. Он смягчает широкий спектр состояний, включая эрозию, истирание и разрушение эмали, одновременно опосредуя множество биологических реакций, обеспечивающих адгезию микробных клеток и клеток-хозяев ^{1, 17}

Хотя существует общее согласие относительно важности С слюнной пленкой остается много неизвестного, включая определение, формирование, толщину и созревание пленки.Одно обычно используемое определение описывает пленку как «свободную от бактерий, белковую» динамическую пленку. ¹⁸ Иногда ее идентифицируют как многослойную пленку, которая первоначально образуется в результате избирательной адсорбции молекул слюны на поверхности полости рта с последующим гомо- или гетеротипным комплексом этих молекул с другими молекулами окружающей слюны. ¹⁸ Во время этого исследования на изображениях MPM иногда наблюдались многослойные пленки [Рис. 8b], но большинство образцов показали один тупой слой пленки [рис.5c, 5d, 6b, 8a, 8c, 8d]. Эти многослойные пленки исчезают по мере созревания пленки (рис. 8), так что, возможно, эти слои могут представлять собой раннюю стадию процесса созревания пленки.

Сообщаемое время образования слюнной пленки сильно различается. Широко расходящиеся оценки времени до созревания биопленки полости рта получены из исследований in vitro , которые варьировались от нескольких минут до нескольких дней. ² Этот фактор важен, потому что пленка in vivo периодически удаляется или изменяется механическими или химическими воздействиями, такими как чистка зубов или химические полоскания.Было высказано предположение, что только зрелые, многодневные слюнные пленки могут эффективно ингибировать эрозионную атаку кислых агентов. ⁴ Однако в другом исследовании не было выявлено значительных различий в защитной функции эмали между 24 часа и 7-дневные слюнные пелликулы образовали in situ . ⁵ Согласно Амаечи ¹⁹ эрозионное разрушение поверхности эмали значительно снижается за счет наличия Слюнная пленка 60-минутной давности.Действительно, согласно недавним открытиям, ⁵ защита эмали слюнной пленкой сформировала in situ за периоды от От 2 до 24 часов не зависит от возраста пленки. В этом исследовании ОКТ показала значительное увеличение сигнала, что означает образование слюнной пленки на поверхности зуба примерно через 30 мин инкубации в слюне [рис. 4b].

Мало что известно о вариациях толщины слюнной пленки in vivo и между людьми, верхней и нижней дугах и конкретных местах на каждом зубе.Тем не менее, этот фактор может значительно повлиять на места и степень эрозии зубов, а также на де- и реминерализацию, прямой кариес и другие патологии твердых и мягких тканей. Отчеты о толщине биопленки полости рта из исследований in vitro варьируются от От 100 до 200 нм до 0,06–0,09 мм. ^{6, 7, 20, 21} Эти расхождения могут частично быть связаны с различной скоростью и количеством адсорбции белка слюны и гликопротеина на поверхности эмали. Данные некоторых исследований предполагают, что состав биопленки полости рта вполне может зависеть от участка.Факторы могут включать природу подлежащей ткани (гладкая поверхность по сравнению с трещиной по сравнению с пародонтальной бороздой), близость к отверстиям слюнных протоков, разные окислительно-восстановительные потенциалы или доступность питательных веществ. На сегодняшний день картирование оральной биопленки in vivo для оценки влияния конкретных факторов на наличие и характеристики биопленки невозможно из-за отсутствия неинвазивного диагностического метода. Однако данные исследований ex vivo были ослаблены очень реальной возможностью повреждения или изменения слюнной пленки во время подготовки образцов для визуализации.

Морфология слоя пленки в основном визуализировалась с помощью методов сканирующей и просвечивающей электронной микроскопии. Обычно подготовка образца включает фиксацию и дегидратацию, что может повлиять на морфологию пленки по сравнению с ее обычно гидратированным состоянием. Хотя атомно-силовая микроскопия (АСМ) может сократить необходимое время визуализации, всегда существует возможность обезвоживания во время визуализации. ²² В этом исследовании потенциальных модификаторов слюнной пленки, таких как обезвоживание и механическое повреждение, удалось избежать за счет использования специально разработанной инкубационной ступени и чашки для визуализации [Рис.1а, 1б, 3]. В среднем Толщина слюнной пленки от 10 до 20 мкм наблюдалась после 120 мин инкубации [фиг. 5c, 5d, 6b, 10 (c) и 10 (d)].

Первоначальная адсорбция дискретных белков слюны на поверхность эмали может быть результатом электростатических взаимодействий через гидрофильные области, оставляя более гидрофобные части молекул белка слюны открытыми на поверхности. ²³ Повышенная адгезия к начальному белковому слою была упомянута как причина морфологии глобулярной поверхности приобретенной слюнной пленки с диаметром глобул в диапазоне от От 80 до 120 нм после 2 часа инкубации. ²¹ В этом исследовании также было идентифицировано образование глобулярных пленок (рис. 7, 8 и 9). Количество и диаметр глобул постепенно увеличивались, пока в конечном итоге они не слились (рис. 8). Это наблюдение может объяснить большой диапазон размеров глобул и толщины пленки, описанный в предыдущих исследованиях. Более того, на размер и распределение глобул могут влиять основные характеристики поверхности твердых тканей и химический состав слюны в определенном месте.

5.

Заключение

Это исследование демонстрирует потенциал использования неинвазивного оптического подхода для получения точных изображений in situ пленки слюнной железы человека. Хотя это исследование выполняется ex vivo , быстрые инновации в разработке зондов должны позволить in vivo in situ изображений слюнной пленки в ближайшем будущем.

Протеомная оценка приобретенных эмалевых чешуек во время формирования in vivo

Abstract

Приобретенная пленка эмали (AEP) — это белковая пленка, которая образуется на поверхности эмали зубов путем избирательной адсорбции белков и пептидов, присутствующих во рту.Эта белковая пленка образует поверхность раздела между эмалью и поврежденной биопленкой полости рта, которая модулирует прикрепление бактерий, обнаруженных в биопленке полости рта. Общая цель этого исследования состояла в том, чтобы получить представление о биологическом образовании человеческого in vivo AEP. Это исследование выдвинуло гипотезу о том, что AEP создается путем образования последовательных белковых слоев, которые состоят из начального связывания с эмалью и последующих белок-белковых взаимодействий. Эта гипотеза была проверена путем наблюдения количественных и качественных изменений в составе пленки в течение первых двух часов образования AEP в полости рта.Количественные подходы масс-спектрометрии были использованы для создания профиля белка AEP для каждой исследуемой временной точки. Относительное протеомное количественное определение было выполнено для 50 белков, наблюдаемых во всех четырех временных точках. Примечательно, что количество важных белков слюны, таких как гистатин 1, уменьшается с увеличением образования AEP, в то время как другие важные белки, такие как статерин, демонстрировали постоянное относительное количество во все моменты времени. Таким образом, это первое исследование, в котором изучается динамический процесс формирования AEP с использованием протеомных подходов.Наши данные продемонстрировали, что во время формирования AEP происходят значительные качественные и количественные протеомные изменения, которые, в свою очередь, вероятно, будут влиять на развитие биопленок полости рта.

Образец цитирования: Lee YH, Zimmerman JN, Custodio W, Xiao Y, Basiri T., Hatibovic-Kofman S, et al. (2013) Протеомная оценка приобретенных чешуек эмали во время формирования In vivo . PLoS ONE 8 (7): e67919. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0067919

Редактор: Энтони Джордж, Технологический университет Сиднея, Австралия

Поступило: 20 апреля 2013 г .; Принято к печати: 21 мая 2013 г .; Опубликовано: 3 июля 2013 г.

Авторские права: © 2013 Lee et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Финансирование: Это исследование было поддержано Советом по естественным наукам и инженерным исследованиям Канады (грант NSERC № 371813), Канадскими институтами исследований в области здравоохранения (грант CIHR № 106657 и грант № 97577) и Канадским фондом исследований в области здравоохранения. Фонд возможностей лидеров инноваций (грант CFI-LOF № 25116).WLS является лауреатом премии CIHR New Investigator Award (грант № 113166). JNZ является получателем стипендии стоматологической ассоциации Онтарио (ODA) и CIHR Schulich Dentistry. YHL получает стипендию CIHR для бакалавриата. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что никаких конкурирующих интересов не существует.

Введение

Состав приобретенной пленки эмали (AEP), сформированной in vivo , был изучен многими методами, включая микроскопию [1], аминокислотный анализ [2], [3], гель-фильтрацию и ионный обмен. хроматография [4], [5], электрофорез и иммуноблоттинг [6], [7], [8], [9], [10], [11], [12].Все эти исследования были ограничены трудностями, возникающими при получении адекватных количеств материала AEP для классической биохимической характеристики [13]. Однако последовательный вывод состоит в том, что аминокислотный состав пленок от разных субъектов очень похож [3]. Недавние разработки чувствительных протеомных методологий открыли новые возможности для характеристики биологических образцов с очень низким содержанием, таких как AEP. Используя эту протеомную технологию, были проведены исследования состава in vitro, [14], [15], in situ, [16], [17] и in vivo, AEP [15], [18] ].В результате этой новой технологии наша группа использовала масс-спектрометрию для получения первого глобального протеома человеческой пленки [19]. Мы успешно идентифицировали 130 белков AEP, которые были охарактеризованы в соответствии с происхождением, предполагаемой биологической функцией и возможной ролью в структуре AEP. Неожиданным открытием стало то, что только 14% идентифицированных белков были получены из секретов экзокринной слюны. Большинство идентифицированных белков пелликулов происходили из неэкзокринных компонентов цельной слюны, включая эпителиальные клетки (68%) и сыворотку (18%).Последний компонент ротовой жидкости попадает в полость рта через десневую щель.

Когда 130 белков были классифицированы на основе их возможной роли в образовании AEP, были идентифицированы три основные группы, вместе составляющие до 61% всех белков. Первая группа состоит из белков, которые обладают способностью связывать ионы кальция, составляющих 18% идентифицированных белков AEP. Среди них — кислые PRP и гистатины, оба белка происходят из экзокринных секреций слюны. Вторая группа (15%) состоит из белков, которые проявляют высокую склонность к связыванию фосфатных ионов, таких как фактор элонгации 2 и миозин-9, оба белка происходят из эпителиальных клеток.Третья группа (28%) состоит из белков, которые, как было описано, взаимодействуют с другими белками. Примером является MUC5B, который, как было описано, образует комплексы с несколькими другими белками слюны, включая α-амилазу слюны, гистатин и статерин [20], [21].

Мы предполагаем, что in vivo пленка AEP создается путем образования последовательных белковых слоев, первоначально основанных на связывании с минералом зуба (кальций и фосфат), а затем на белок-белковом взаимодействии.Эта рабочая гипотеза будет изучена путем оценки количественных и качественных изменений в составе AEP в течение первых двух часов формирования в полости рта. Метод количественной масс-спектрометрии будет выполнен для создания профиля белка AEP для каждого исследуемого момента времени. Мы ожидаем идентифицировать и охарактеризовать конкретные профили протеома для начальной и конечной стадий формирования AEP, где белки или пептиды со сродством к гидроксиапатиту будут более многочисленными на первых стадиях образования AEP, а оставшиеся компоненты AEP будут впоследствии включены в пленочная пленка.

Методы

Приобретенная коллекция эмалевых пелликул

Это исследование было одобрено Исследовательским советом по этике человека Университета Западного Онтарио (номер обзора 16181E). Письменное информированное согласие было получено от всех субъектов в этом исследовании. AEP были получены у 7 пациентов, включая 4 мужчин и 3 женщин (в возрасте от 20 до 30 лет). Участниками были здоровые люди, не страдающие системными заболеваниями и заболеваниями полости рта. Образцы собирались с 9 до 11 часов утра.Субъектам не разрешалось есть или пить за 2 часа до сбора образцов. Каждому участнику была проведена стоматологическая профилактика с целью удаления ранее существовавшего AEP. Впоследствии их попросили дождаться каждой временной точки, чтобы образовалась АЕР на поверхности эмали. В данном исследовании использовались четыре разных момента времени; в том числе 5, 10, 60 и 120 мин. Сборы проводились, как описано ранее [22], в разные дни для каждого момента времени с использованием одних и тех же добровольцев.После сбора образцы хранили при –80 ° C.

Элюция AEP из полосок для сбора с помощью ультразвуковой обработки

Все полоски для сбора собирали в пробирку Falcon на 15 мл. Образцы пула для каждой временной точки хранились отдельно. Три мл 50 мМ NH ₄ HCO ₃ , pH 7,8 добавляли в пробирки до тех пор, пока все полоски не были погружены в раствор. Затем образцы обрабатывали ультразвуком при комнатной температуре в течение 1 мин. Супернатанты собирали и сушили в роторном испарителе.Micro-BCA выполняли для измерения общей концентрации белка с каждой временной точки AEP.

Переваривание в растворе

Равное количество белка (20 мкг) из каждой временной группы сушили на роторном испарителе, денатурировали и восстанавливали в течение 2 часов путем добавления 200 мкл 4 М мочевины, 10 мМ дитиотреитола (DTT) и 50 мМ NH _{. 4} HCO ₃ , pH 7,8. После четырехкратного разбавления 50 мМ NH ₄ HCO ₃ , pH 7,8, триптическое расщепление проводили в течение ночи при 37 ° C, после добавления 2% (мас. / Мас.) Трипсина для секвенирования (Promega, Madison, Висконсин, США).После периода переваривания белка образцы полностью сушили, чтобы остановить ферментативную реакцию.

Жидкостная хроматография с ионизацией электрораспылением Тандемная масс-спектрометрия (LC-ESI-MS / MS)

Разделение пептидов и масс-спектрометрические анализы были выполнены с помощью нано-ВЭЖХ Proxeon (Thermo Scientific, Сан-Хосе, Калифорния, США), который позволяет проводить жидкостную хроматографию в потоке с капиллярной колонкой, 75 мкм X 10 см (Pico Tip ™ EMITTER, New Objective, Woburn, MA), упакованный на месте с использованием смолы Magic C18 диаметром 3 мкм и размером пор 200 Å (Michrom BioResources, Auburn, CA), соединенной с масс-спектрометром (LTQ-Velos, Thermo Scientific, Сан-Хосе, Калифорния, США) ) с использованием ионизации электрораспылением в обзорном сканировании в диапазоне значений m / z 390–2000 тандемных МС / МС.Равное количество всех образцов (20 мкг / каждая группа) ресуспендировали в 20 мкл 97,5% H ₂ O / 2,4% ацетонитрила / 0,1% муравьиной кислоты, а затем подвергали обращенно-фазовой ЖХ-ESI-MS / MS. . Нанопоточная ВЭЖХ с обращенной фазой была разработана с линейным градиентом 80 минут в диапазоне от 5% до 55% растворителя B за 65 минут (97,5% ацетонитрила, 0,1% муравьиной кислоты) при скорости потока 300 нл / мин с максимальной давление 280 бар. Напряжение электрораспыления и температура капилляра для переноса ионов составляли 1,8 кВ и 250 ° C соответственно.Каждое обзорное сканирование (MS) сопровождалось автоматическим последовательным отбором семи пептидов для CID с динамическим исключением ранее выбранных ионов.

Полученные спектры МС / МС сравнивали с базами данных белков человека (Swiss Prot и TrEMBL, Швейцарский институт биоинформатики, Женева, Швейцария, http://ca.expasy.org/sprot/) с использованием алгоритма SEQUEST в программе Proteome Discoverer 1.3 ( Thermo Scientific, Сан-Хосе, Калифорния, США). Результаты поиска были отфильтрованы по коэффициенту ложного обнаружения 1% с использованием стратегии поиска-приманки с использованием обратной базы данных.Дополнительным критерием включения для положительной идентификации белков был тот же самый белок, прошедший оценку фильтра, по крайней мере, в трех различных анализах MS из одной и той же группы времени, всего в четырех анализах MS на группу.

Интеграция и количественное определение относительного протеома

Для количественного протеомного анализа три исходных файла MS из каждой объединенной группы были проанализированы с использованием технологии SIEVE (версия 2.0 Thermo Scientific, Сан-Хосе, Калифорния, США). Обработка сигнала проводилась в 12 необработанных файлах MS.Экспериментальный рабочий процесс SIEVE был определен как «Контрольный сравнительный анализ тенденций», когда один класс образцов сравнивался с одним или несколькими другими классами образцов. Здесь контрольные образцы (5-минутный период AEP) сравнивали с каждым из образцов, которые были собраны в разные моменты времени (10, 60 и 120 минут). На этапе выравнивания в качестве эталонного файла был выбран один исходный файл MS, принадлежащий группе 5-минутной AEP, а все остальные файлы были скорректированы для получения наилучшей корреляции с этим эталонным файлом.После согласования процесс обнаружения и интеграции (или кадрирования) выполнялся с использованием данных уровня MS с функцией, называемой только «Кадры из сканирования MS2». При использовании этого типа кадрирования использовались только значения отношения массы к заряду MS (m / z), которые были связаны со сканированием MS2. Любые измерения m / z без MS2 игнорировались. Используемые параметры включали ширину кадра m / z 1500 ppm и время удерживания 1,75 мин. Всего было проведено 73456 сканирований MS2 во всех 12 файлах RAW, в результате чего получился 11151 кадр.Затем для каждого кадра было выполнено интегрирование пиков, и эти значения использовались для статистического анализа. Затем пептидные последовательности, полученные в результате поиска в базе данных с использованием алгоритма SEQUEST в Proteome Discoverer 1.3, были импортированы в SIEVE. Во время импорта к пептидным последовательностям применялся фильтр, который удалял все последовательности с q-значением Percolator, превышающим 1% (уровень ложного обнаружения). Пептиды были сгруппированы в белки и рассчитаны соотношение белков и p-значение. SIEVE использует средневзвешенное значение интенсивностей пептидов для расчета белка.При использовании средневзвешенного значения пептиды с более низкой дисперсией в измерениях их интенсивности имеют более высокий вес в общем соотношении белков. Это было сделано для уменьшения дисперсии количеств уровня белка на основе дисперсии пептидов, из которых состоят белки. Были определены только белки, наблюдаемые во всех четырех временных группах. Группа с 5-минутной AEP использовалась в качестве нашей группы по умолчанию, а все остальные три группы сравнивались с 5-минутной группой AEP.

Относительное содержание отдельного белка из 5-минутной группы AEP считалось значительно отличающимся уровнем белка, когда наблюдаемые значения были <0.75 для уменьшения численности или> 1,25 для увеличения численности, и значение p <0,05, как описано [23].

Результаты

Пептидные ионы были идентифицированы с помощью поиска SEQUEST в соответствии с критериями, описанными в разделе «Методы». Для протеомной идентификации AEP, сформированного во всех четырех различных временных точках, проведенных в этом исследовании, в общей сложности было идентифицировано 89 различных белков при 5-минутном образовании AEP, 92 различных белка были идентифицированы при 10-минутном образовании AEP, 107 различные белки были идентифицированы при 60-минутном образовании AEP, и 101 другой белок был идентифицирован при 120-минутном образовании AEP (Таблица 1).Большинство белков было идентифицировано во всех четырех группах, что указывает на высокое перекрытие белков AEP. На рисунке 1 показана диаграмма Венна с количеством белков из каждой группы и их перекрытиями среди четырех групп. Всего во всех четырех группах присутствовало 50 белков. Шесть белков присутствовали исключительно в 5-минутной группе AEP. Четыре белка присутствовали исключительно в 10-минутной группе AEP. Два белка присутствовали исключительно в 60-минутной группе AEP, а другие 3 белка присутствовали только в 120-минутной AEP (Таблица 1; Рисунок 1).

Относительная протеомная количественная оценка была проведена для 50 белков, наблюдаемых во всех группах временных точек AEP. Дифференциальное отображение спектров МС / МС осуществляли с помощью программного обеспечения SIEVE. Первым шагом в количественном протеомном анализе с помощью SIEVE было содействие выравниванию всех хроматограмм масс-спектрометрии. Одна из масс-спектрометрических хроматограмм была отмечена как хроматограмма по умолчанию (5-минутная AEP). Все остальные хроматограммы сравнивали с стандартной. Значения коэффициента корреляции были получены для каждой масс-спектрометрической хроматограммы, и средние значения оценки были рассчитаны для каждой группы.Значения составляли от 0,831 до 10-минутной AEP группы, от 0,851 до 60-минутной AEP группы и от 0,813 до 120-минутной AEP.

Пороговое значение для значимого дифференциального уровня было установлено при вариации выше или ниже 25% уровня белка, наблюдаемого в контрольной группе. Всего 40 белков показали дифференциальный уровень между 5-минутной группой AEP и 10-минутной группой AEP, где 22 белка показали уровень снижения, а 18 белков показали уровень повышения. Кроме того, 19 белков показали уровень снижения между 5-минутной группой AEP и 60-минутной группой AEP, а 17 белков показали уровень повышения.Сравнение группы 5-минутной AEP с группой 120-минутной AEP продемонстрировало 24 белка со сниженным уровнем белка, а 14 белков показали увеличение (Таблица 2).

белков пелликул для каждой временной точки анализировали в соответствии с их ролью в формировании структуры AEP или молекулярном взаимодействии; и белки были разделены на три основные группы (Таблица 1; Рисунок 2). В целом, белки AEP, содержащие кальций и фосфатсвязывающие свойства, были более преобладающими при подсчете 5-минутного и 10-минутного образования AEP, между 50% и 85%, соответственно (Таблица 1).В то время как белки AEP со свойством белок-белкового взаимодействия демонстрировали постепенное увеличение в соответствии с развитием пленки (рис. 2).

Обсуждение

Одним из основных достижений этого исследования было получение более широкого понимания профиля белкового паттерна AEP в течение его первых двух часов формирования. В этом исследовании был использован современный подход, безметочная количественная протеомика, основанная на масс-спектрометрии, для изучения членов белков-предшественников, присутствующих в AEP, и их поведения во время формирования AEP.Интересно, что в соответствии с происходящим развитием пленки измеренное значение выравнивания стало более отдаленным, чем хроматограмма по умолчанию (5-минутная АЕР, установленный балл 1). Это наблюдение предполагает изменение количества и качества белков / пептидов в зависимости от образования пленки.

Оба белка, гистатин 1 и гистатин 3, продемонстрировали резкое снижение численности через 60 и 120 минут образования пленки по сравнению с образованием пленки в первые 5 минут (рис. 3A, B).Несмотря на высокое сродство этих белков к поверхности эмали, гистатины очень чувствительны к протеолитической деградации [24], [25]. С другой стороны, недавнее исследование показало, что гистатин 1, прикрепленный к поверхности эмали; этот белок менее подвержен протеолитической деградации [26]. В нашем исследовании мы наблюдали высокое содержание этих белков на начальной стадии формирования пленки (5-минутная группа AEP), что может быть коррелировано с хорошо охарактеризованными характеристиками этих белков как белка-предшественника в образовании AEP, но значительное сокращение по времени развития AEP.Это наблюдение может быть связано с предрасположенностью к расщеплению белков, обычно наблюдаемой в этом семействе белков, когда они находятся в слюне или прикрепляются к поверхности эмали.

Рис. 3. Динамика изменения количества специфических белков AEP.

(A) гистатин 1, (B) гистатин 3, (C) статерин, (D) кислый PRP1, (E) амилаза, (F) MUC5B, (G) лизоцим, (H) лактопероксидаза. Примечание: * обозначает статистическую разницу по сравнению с 5-минутной временной точкой AEP. р> 0,05.

https: // doi.org / 10.1371 / journal.pone.0067919.g003

Другие важные белки слюны, такие как статерин, который имеет сходные характеристики с гистатинами, имеет высокое сродство к гидроксиапатиту и подвержен протеолитической деградации в слюне [27], продемонстрировал совершенно разные шаблон. Относительное содержание белка статерина не изменилось в течение периода времени для in vivo развития AEP (рис. 3C). Это открытие указывает на то, что статерин представляет собой белок, присутствующий в первые и последние минуты образования AEP с аналогичным количеством, предполагая, что этот белок не очень чувствителен к протеолитической деградации, как гистатины, когда он связан с эмалью; или этот белок не заменен другими белками или пептидами, которые включены в AEP.Однако наше предыдущее исследование пептидома in vivo AEP идентифицировало и охарактеризовало пять природных пептидов статерина в диапазоне от N-концевого до C-концевого, демонстрируя присутствие пептидов статерина [22]. Аналогичное явление наблюдалось с цистатином D, где не было значительного изменения численности в соответствии с прогрессом развития AEP. Другие цистатины, такие как цистатин S и SA, продемонстрировали другой состав, где эти два белка относительно увеличивались в течение 10 и 60 минут образования AEP и относительно снижались в последний оцениваемый период времени.

Неожиданное и интересное поведение наблюдалось с кислым PRP1, фосфопротеином, который обладает высоким сродством к гидроксиапатиту и является мощным ингибитором вторичного осаждения фосфата кальция, что в значительной степени связано с их двумя фосфатными группами, ковалентно связанными с остатками Ser в положении 8 и 22 [28]. Этот фосфопротеин показал относительное увеличение на 137% после 120-минутного образования AEP (Рисунок 3D). Это наблюдение очень важно, поскольку считается, что преобладающая роль этого семейства белков в полости рта связана с минеральным гомеостазом и поддержанием целостности зубов.

Хорошо охарактеризованные белки слюны, такие как амилаза, MUC5B, лизоцим и лактопероксидаза, продемонстрировали значительное изменение увеличения в соответствии с развитием in vivo AEP (рис. 3E, F, G, H). Все эти белки обладают особенностями межбелкового взаимодействия с другими белками слюны [20], [21]. Эта характеристика может оправдать относительное повышение уровня этих белков на последней стадии формирования AEP, когда, например, эти белки могут связываться с другими белками, такими как гистатин 1.В связи с этим недавно мы продемонстрировали, что гистатин 1 способен взаимодействовать в общей сложности с 43 белками слюны, включая амилазу, MUC 5B, лизоцим и лактопероксидазу [29].

Таким образом, это первое исследование, которое исследует динамический процесс формирования AEP с использованием протеомных подходов. Кроме того, это исследование продемонстрировало, что существует тенденция к тому, что белки слюны, обладающие сродством к кальцию и фосфату, могут быть более многочисленными на ранних стадиях формирования AEP, в то время как белки с признанным свойством взаимодействия белок-белок более значимы в окончательном развитии AEP. .Понимание образования пленок представляет большой интерес в области профилактической стоматологии, поскольку пленка служит твердой опорой для развития биопленки зубного налета. Таким образом, разумно предположить, что вмешательство в белковый состав и структуру AEP во время его образования может быть важным профилактическим подходом. В долгосрочной перспективе эти результаты могут быть использованы для разработки заменителей слюны и терапевтических средств для контроля роста биопленок и реминерализации раннего кариеса.

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: WLS SHK. Проведены эксперименты: WLS YHL JNZ WC YX. Проанализированы данные: WLS YHL JNZ TB. Предоставленные реагенты / материалы / инструменты анализа: WLS. Написал статью: WLS.

Список литературы

1. 1. Schupbach P, Oppenheim FG, Lendenmann U, Lamkin MS, Yao Y, et al. (2001) Электронно-микроскопическая демонстрация богатых пролином белков, статерина и гистатинов в приобретенных пленках эмали in vitro.Eur J Oral Sci 109: 60–68.
2. 2. Mayhall CW (1975) Исследования состава пленки эмали. Ala J Med Sci 12: 252–271.
3. 3. Rykke M, Sonju T, Rolla G (1990) Межиндивидуальные и продольные исследования аминокислотного состава пленки, собранной in vivo. Scand J Dent Res 98: 129–134.
4. 4. Eggen KH, Rolla G (1982) Гель-фильтрация, ионообменная хроматография и химический анализ макромолекул, присутствующих в приобретенной пленке эмали (2-часовой пленке).Scand J Dent Res 90: 182–188.
5. 5. Eggen KH, Rolla G (1983) Дальнейшие исследования состава полученной эмалевой пленки. Scand J Dent Res 91: 439–446.
6. 6. Kousvelari EE, Baratz RS, Burke B, Oppenheim FG (1980) Иммунохимическая идентификация и определение богатых пролином белков в слюнных секретах, пленках эмали и образцах железистой ткани. J Dent Res 59: 1430–1438.
7. 7. Бенник А., Чау Г., Гудлин Р., Абрамс С., Тустиан Д. и др.(1983) Роль кислотных белков, богатых пролином слюны человека, в формировании приобретенной зубной пленки in vivo и их судьба после адсорбции на поверхности эмали человека. Arch Oral Biol 28: 19–27.
8. 8. Аль-Хашими I, Левин М.Дж. (1989) Характеристика эмалевой пленки, полученной in vivo из слюны. Arch Oral Biol 34: 289–295.
9. 9. Edgerton M, Levine MJ (1992) Характеристика приобретенной пленки зубного протеза от здоровых пациентов и пациентов с стоматитом. J Prosthet Dent 68: 683–691.
10. 10. Carlen A, Borjesson AC, Nikdel K, Olsson J (1998) Состав пленок, образованных in vivo на поверхности зубов в различных частях зубного ряда, и in vitro на гидроксиапатите. Caries Res 32: 447–455.
11. 11. Ли Дж., Хелмерхорст Э. Дж., Корли Р. Б., Люус Л. Е., Трокслер РФ и др. (2003) Характеристика иммунологических ответов на пленку эмали, приобретенную человеком in vivo, как новый способ исследования ее состава. Устный Microbiol Immunol 18: 183–191.
12. 12. Li J, Helmerhorst EJ, Troxler RF, Oppenheim FG (2004) Идентификация компонентов пленки in vivo путем анализа иммунных ответов сыворотки. J Dent Res 83: 60–64.
13. 13. Siqueira WL, Helmerhorst EJ, Zhang W, Salih E, Oppenheim FG (2007) Приобретенная пленка эмали и ее потенциальная роль в диагностике полости рта. Анналы Нью-Йоркской академии наук 1098: 504–509.
14. 14. Виторино Р., Лобо М.Дж., Дуарте Дж., Феррер-Коррейя А.Дж., Томер К.Б. и др.(2004) Гидроксиапатит адсорбировал белки слюны in vitro. Biochem Biophys Res Commun 320: 342–346.
15. 15. Яо Й., Гроган Дж., Зендер М., Ленденманн У., Нам Б. и др. (2001) Анализ состава приобретенной пленки эмали человека с помощью масс-спектрометрии. Arch Oral Biol 46: 293–303.
16. 16. Vitorino R, Calheiros-Lobo MJ, Duarte JA, Domingues PM, Amado FM (2008) Пептидный профиль пленки эмали, приобретенной человеком, с использованием тандемной MS MALDI. J Sep Sci 31: 523–537.
17. 17.Виторино Р., Калхейрос-Лобо М.Дж., Уильямс Дж., Феррер-Коррейя А.Дж., Томер К.Б. и др. (2007) Пептидомный анализ приобретенной у человека пленки эмали. Биомедицинский хроматограф 21: 1107–1117.
18. 18. Yao Y, Berg EA, Costello CE, Troxler RF, Oppenheim FG (2003) Идентификация белковых компонентов в приобретенной человеком пленке эмали и цельной слюне с использованием новых подходов протеомики. J Biol Chem 278: 5300–5308.
19. 19. Siqueira WL, Zhang W, Helmerhorst EJ, Gygi SP, Oppenheim FG (2007) Идентификация белковых компонентов в пленке эмали, приобретенной человеком in vivo, с использованием LC-ESI-MS / MS.J Proteome Res 6: 2152–2160.
20. 20. Иончева И., Оппенгейм Ф.Г., Оффнер Г.Д., Трокслер Р.Ф. (2000) Молекулярное картирование статерин- и гистатин-связывающих доменов в муцине слюны человека MG1 (MUC5B) с помощью дрожжевой двугибридной системы. J Dent Res 79: 732–739.
21. 21. Иончева И., Оппенгейм Ф.Г., Трокслер Р.Ф. (1997) Муцин слюнной железы человека MG1 избирательно образует гетеротипические комплексы с амилазой, богатыми пролином белками, статерином и гистатинами. J Dent Res 76: 734–743.
22. 22.Siqueira WL, Oppenheim FG (2009) Белки / пептиды с малой молекулярной массой, присутствующие в образованной in vivo пленке эмали человека, полученной человеком. Arch Oral Biol 54: 437–444.
23. 23. Дуан X, Янг Р., Штраубингер Р.М., Пейдж Б, Цао Дж. И др. (2009) Простая и высокоэффективная процедура осаждения / переваривания на осадке в сочетании с разделением с использованием длинного градиента нано-ЖХ и масс-спектрометрией Orbitrap для профилирования безметки экспрессии митохондриального протеома сердца свиньи.J Proteome Res 8: 2838–2850.
24. 24. Helmerhorst EJ, Alagl AS, Siqueira WL, Oppenheim FG (2006) Протеолитические эффекты пероральной жидкости на структуру и функцию гистатина 5. Arch Oral Biol 51: 1061–1070.
25. 25. Кастаньола М., Инзитари Р., Россетти Д.В., Олми С., Кабрас Т. и др. (2004) Каскад из 24 гистатинов (фрагментов гистатина 3) в слюне человека. Предложения по пре-секреторному пути последовательного расщепления. Журнал биологической химии 279: 41436–41443.
26. 26.McDonald EE, Goldberg HA, Tabbara N, Mendes FM, Siqueira WL (2011) Гистатин 1 сопротивляется протеолитической деградации при адсорбции на гидроксиапатите. Журнал стоматологических исследований 90: 268–272.
27. 27. Helmerhorst EJ, Traboulsi G, Salih E, Oppenheim FG (2010) Масс-спектрометрическая идентификация ключевых сайтов протеолитического расщепления в статерине, влияющих на минеральный гомеостаз и бактериальные связывающие домены. Журнал протеомных исследований 9: 5413–5421.
28. 28. Oppenheim FG, Salih E, Siqueira WL, Zhang W, Helmerhorst EJ (2007) Протеом слюны и его генетические полиморфизмы.Ann N Y Acad Sci 1098: 22–50.
29. 29. Siqueira WL, Lee YH, Xiao Y, Held K, Wong W (2012) Идентификация и характеристика слюнных комплексов гистатина 1 с помощью масс-спектрометрии. Протеомика 12: 3426–3435.

Основы отбеливания зубов

Основы отбеливания зубов

Как гигиенист в SoundBridge, меня спрашивают об отбеливании зубов, наверное, больше, чем по любой другой теме. Как это работает? Это безопасно? Что в первую очередь вызывает обесцвечивание? Список можно продолжать и продолжать…

Сначала небольшой урок анатомии. Зубы состоят из внутреннего слоя, называемого дентином, и жесткого защитного внешнего слоя, называемого эмалью. Слой эмали состоит из кристаллов гидроксиапатита, которые образуют микроскопические стержни. Этот слой эмали является пористым, что означает, что любые окрашивающие агенты, оставшиеся на поверхности зубов, могут проникать в стержни, тем самым встраиваясь в зубы и со временем окрашивая их.

А теперь поговорим о пятнах. Каждый раз, когда вы кладете что-нибудь в рот, включая еду, табак, кофе и т. Д., другой слой, называемый пленкой, образует слой эмали ваших зубов. Эта пленка начинает формироваться буквально через несколько секунд после того, как ее смахивают! Со временем эта пленка проникает в пористую эмаль и окрашивает зубы. Кофе, чай, табак, ягоды, красное вино, томатные соусы и горчица — одни из наиболее распространенных продуктов, вызывающих пятна.

Здесь на сцену выходят отбеливатели для зубов. Активным отбеливающим ингредиентом отбеливателя является перекись водорода. Тот же ингредиент, что и для осветления волос! В процедурах отбеливания используется это отбеливающее вещество, которое проникает в пористую эмаль зубов и разрушает окрашивающие вещества.Отбеливание лучше всего работает с желтоватыми пятнами и некоторыми коричневатыми пятнами, но может вообще не работать при обесцвечивании серых пятен. Важно помнить, что стоматологические работы, такие как коронки, мосты и пломбы цвета зубов (смола), не осветляются с помощью отбеливателя.

Безопасно ли отбеливание для моих зубов? Да! Перекись водорода используется для разрушения пятна, но она никак не влияет на минеральную структуру самого зуба.

Есть ли побочные эффекты? Основной риск, о котором следует знать, — это повышенная чувствительность зубов.Не все испытывают чувствительность, но у тех, кто испытывает чувствительность, она может сохраняться в течение нескольких дней после лечения и варьируется в зависимости от метода и концентрации используемого отбеливателя. Если вы используете в домашних условиях отбеливатель, его избыток, попадающий на ткань десен, может вызвать раздражение. Важно стереть лишний гель и сообщить нам, если проблема не исчезнет.

В SoundBridge Dental Arts мы предлагаем отбеливание Zoom в качестве нашей надежной процедуры в офисе.Отбеливающие ванночки, отбеливающие полоски, отбеливающие зубные пасты и жидкости для полоскания рта — все это широко используемые продукты. Что вам подходит? При следующем посещении спросите нас! Мы будем рады рассказать, какой процесс приведет вас к собственному жемчужно-белому цвету!

.

No related posts.